上海交通大学遗传学果蝇杂交方案第5组.docx

果蝇杂交实验方案 一、实验的目的 1.1验证基因伴性遗传的规律 1.2验证基因连锁与交换规律并计算重组值 二、实验材料 不同品系的黑腹果蝇：红眼（W）与白眼（w），长翅（M）与小翅（m），直刚毛（Sn）与焦刚毛（sn）。 饲料：玉米饲料、米粉饲料、香蕉饲料。 饲养瓶。 三、实验原理 3.1杂交方式的确定 3.1.1伴性遗传：正交、反交 控制果蝇眼色的等位基因位于X染色体上，Y染色体上没有相应的等位基因，它们随着X染色体传给下一代。 若以纯合红眼雄蝇与纯合白眼雌蝇杂交（正交），F1代雌蝇均为红眼，雄蝇均为白眼，F2代雌雄蝇中红眼与白眼都占一半。而反交， F1代均为红眼，F2代雌蝇均为红眼，雄蝇半数为红眼半数白眼。正反交结果不同，正是伴性遗传的一大特征。 3.1.2连锁交换：三点测验法 三点测交法就是研究三个基因在染色体上的位置。如a、b、c三个基因是连锁的，要测定三个基因的相对位置可以用野生型果蝇（+++，表示三个相应的野生型基因）与三隐性果蝇（abc，三个突变型基因）杂交，制成三因子杂种abc/+++，再用三隐性个体对雌性三因子杂种进行测交，以测出三因子杂种在减数分裂中产生的配子类型和相应数目。 由于基因间的交换，除产生亲本类型的两种配子外，还有六种重组型配子，因而在测交后代中有8种不同表型的果蝇出现，这样经过数据的统计和处理，一次试验就可以测出三个连锁基因的距离和顺序。 3.2遗传式 A.正交与反交 B.连锁交换 F2 亲本型 +++（红长直），w vg s（白小焦） 交换型 w++(白长焦） , +vg s（红小直）, + vg +（红小直）, w+s（白长焦）, ++s（红长焦）, w vg +（白小直） 交换值的计算： 眼色与翅型 （白长+红小）配子类型/总配子类型 ×100% 眼色与刚毛 （白直+红焦）配子类型/总配子类型 ×100% 翅型与刚毛 （小直+长焦）配子类型/总配子类型 ×100% 3.3果蝇的交配 将雌雄果蝇放在一起培养，雌蝇有贮精囊，一次交配即可获得大量的精子，供多次排卵时受精。 如需不同品系之间进行杂交，则需要收集处女蝇。在观察到发黑的蛹时，将成蝇全部赶去，24小时内出来的雌蝇基本上是处女蝇。 将所需品系的雌蝇与雄蝇放在一起培养，如果需要观察F1代的性状，7-8天后，需要倒掉亲本，避免F1代雌蝇与父本杂交，影响结果。 3.4果蝇饲养瓶的配制： (一)玉米饲料 1、取应加水，使充量的一半，加入琼脂，煮沸沸溶解。 2、取另一半水混合玉米粉，加热，调成糊状 3、将上述两者混合，煮沸，以上操作都要搅拌，以免沉积物烧焦。 4、待稍冷后加入酵母菌及丙酸，充分调匀分装，按附表用量配制可得饲料200ml左右 (二)米粉饲料 方法与玉米饲料相同 （三）香蕉饲料 1、将熟透的香蕉捣碎，制成香蕉浆 2、将琼脂加到水中煮沸，使充分溶解 3、将琼脂溶液加入香蕉浆，煮沸 4、待稍冷后加入酵母菌粉及丙酸，调匀分装 3.5果蝇的麻醉与观察： 将果蝇收集到麻醉瓶中，在塞子上滴加4-5滴乙醚浆果蝇暂时麻醉，用毛笔进行杂交、观察等处理；若要彻底处死果蝇，可多加乙醚，长时间麻醉，果蝇翅膀外展45度，说明死亡。 如果需要赶去整瓶的成蝇，可直接将果蝇倒入乙醇中处死。 将果蝇暂时麻醉或麻醉死后可在解剖镜下进行观察。 四、实验步骤 4.1亲本的纯种培养 4.1.1 亲本饲养瓶的准备 1、取应加水量的一半，加入琼脂煮沸搅拌融化； 2、加入白糖； 3、取另一半水将玉米粉调成糊状，加入到琼脂水中搅拌煮成糊状； 4、加入0.5ml丙酸搅拌； 5、分装入培养瓶，大约2cm高，塞上棉塞； 6、高压灭菌，15磅/cm220分种，冷却后加入酵母及灭菌的栖息纸。 4.1.2 果蝇的麻醉与转瓶 将果蝇收集到麻醉瓶中，在塞子上滴加4-5滴乙醚浆果蝇暂时麻醉，用毛笔进行杂交、观察等处理。 转移时需先将果蝇拍到培养瓶下部，后与另一培养瓶对接，颠倒使果蝇转移。 4.2杂交1（伴性遗传的观察） 4.2.1 杂交用饲养瓶的准备 取17g玉米粉，加入到煮熔的琼脂浆中（150mL水+1.5g琼脂+13g蔗糖），拌匀煮沸，冷却后加入1mL丙酸，搅匀后将其注入到培养瓶中，厚度约两厘米，后撒入1.4g乳酸菌干粉于表面，并用酒精棉球或吸水纸将瓶壁上的水汽擦净，塞上棉塞。 注：分装前将饲养瓶，棉塞，吸水纸及其它用具和器皿高压蒸气灭菌15min。分装时若瓶口较小，用大漏斗将饲料倒入，勿使饲料粘附瓶壁。若无干酵母粉，