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第九章 DNA生物合成 周口师范学院生命科学系 ;;DNA dependent DNA polymerase——DDDP DNA dependent RNA polymerase——DDRP RNA dependent RNA polymerase——RDRP RNA dependent DNA polymerase——RDDP;第一节 DNA的半保留复制;DNA在复制时，以亲代DNA的每一股作模板，合成完全相同的两个双链子代DNA，每个子代DNA中都含有一股亲代DNA链，这种现象称为DNA的半保留复制(semi-conservative replication)。 ; ;DNA以半保留方式进行复制，是在1958年由M. Meselson 和 F. Stahl 所完成的实验所证明。 该实验首先将大肠杆菌在含15N的培养基中培养约十五代，使其DNA中的碱基氮均转变为15N。然后将大肠杆菌移至只含14N的培养基中同步培养一代、二代、三代。分别提取DNA，作密度梯度离心，将具有不同密度的DNA分离开。;DNA半保留复制研究实验结果示意图;1） 底物(substrate) 2） 模板(template) 3） 引发体和RNA引物 4） 各种酶系 5) 单链DNA结合蛋白 ;以四种脱氧核糖核酸(deoxynucleotide triphosphate)为底物，即dATP，dGTP，dCTP，dTTP。;DNA复制过程中脱氧核糖核苷酸的聚合反应;DNA复制是模板依赖性的，必须要以亲代DNA链作为模板。亲代DNA的两股链解开后，可分别作为模板进行复制。 ;引物酶(primerase)本质上是一种依赖DNA的RNA聚合酶（DDRP），该酶以DNA为模板，聚合一段RNA短链引物(primer)，以提供自由的3’-OH，使子代DNA链能够开始聚合。 引物酶需组装成引发体才能催化RNA引物的合成。; Dna A;3 HO;4) DNA复制的酶类;解旋酶; DNA聚合酶;5′ A G C T T C A G G A T A ? 3′ | | | | | | | | | | |;在原核生物中，目前发现的DNA聚合酶有三种，分别命名为DNA聚合酶Ⅰ（pol Ⅰ），DNA聚合酶Ⅱ（pol Ⅱ），DNA聚合酶Ⅲ（pol Ⅲ），这三种酶都属于具有多种酶活性的多功能酶。 参与DNA复制的主要是pol Ⅲ和pol Ⅰ。;pol Ⅰ为具有三种酶活性的单一肽链的大分子蛋白质，可被特异的蛋白酶水解为两个片段，其中的大片段保留了两种酶活性,即5→3聚合酶和3→5外切酶活性，通常被称为Klenow fragment。 ;pol Ⅲ由十种亚基组成不对称异源二聚体结构，其中?亚基具有5→3聚合DNA的酶活性，具有复制DNA的功能；而?亚基具有3→5外切酶的活性，与DNA复制的校正功能有关。 ;大肠杆菌DNA聚合酶Ⅲ全酶的结构和功能; 原核生物三种DNA聚合酶比较?;真核生物五种DNA聚合酶;真核生物的DNA聚合酶;DNA连接酶(DNA ligase)可催化两段DNA片段之间磷酸二酯键的形成，从而把两段相邻的DNA链连接成一条完整的链。 ;DNA连接酶;DNA连接酶催化的条件 ① 需一段DNA片段具有3-OH，而另一段DNA片段具有5-Pi基； ② 未封闭的缺口位于双链DNA中，即其中有一条链是完整的； ③ 需要消耗能量，在原核生物中由NAD+供能，在真核生物中由ATP供能。; DNA连接酶在复制中起最后接合缺口的作用。 在DNA修复、重组及剪接中也起缝合缺口作用。 是基因工程的重要工具酶之一。;解螺旋酶，又称解链酶或rep蛋白，是用于解开DNA双链的酶蛋白。 每解开一对碱基，需消耗2分子ATP。;DNA拓扑异构酶(DNA topoisomerase);10;解链过程中正超螺旋的形成;拓扑异构酶的作用特点 既能水解 、又能连接磷酸二酯键;拓扑异构酶Ⅰ;单链DNA结合蛋白（single strand binding protein, SSB），又称螺旋反稳蛋白(HDP)，是一些能够与单链DNA结合的蛋白质因子。;SSB的生理作用;DNA在复制时，需在特定的位点起始，这是一些具有特定核苷酸排列顺序的片段，即复制起始点(origin) 。 在原核生物中，复制起始点通常为一个，而在真核生物中则为多个。;细菌和酵母菌中DNA复制起始点的碱基序列;大肠杆菌复制起点成串排列的重复序列;习惯上把两个相邻DNA复制起始点之间的距离（或DNA片段）定为一个复制子(replicon) 。 复制子是独立完成复制的功能