05土壤中分解尿素尿素的细菌的分离和计数.pptVIP

微生物的培养与应用;(一)筛选分离分解尿素的细菌 ;选择培养基:在微生物学中,将允许特定种类的微生物生长,同时抑制或阻止其它微生物生长的培养基.;加入青霉素的培养基:分离酵母菌、霉菌等真菌 加入高浓度食盐的培养基: 分离金黄色葡萄球菌;(3)培养基成分分析; 在该培养基的配方中，葡萄糖是C源也是能源;尿素是培养基中的惟一氮源. 因此，原则上该培养基只有能够利用尿素的微生物才能够生长。具有选择作用,能够将利用尿素的微生物选择出来;（二）微生物生长量的测定方法：;说明： 1）间接计数中，恰当的稀释度是成功统计的菌落数目的关键（参见实验设计部分）； 2）间接计数统计的菌落数往往比活细菌数目低。;思考题;　A同学的结果与其他同学不同，可能的解释有三种。 一是由于土样不同； 二是由于培养基污染或操作失误; 三是实验组太少，缺乏可重复性。;　　另一种方案(空白对照)： 　　将A同学配制的培养基在不加土样的情况下进行培养，作为空白对照，以证明培养基是否受到污染(做四个平板)。通过这个事例可以看出，实验结果要有说服力，对照的设置是必不可少的。;四、实验案例 ; 准备牛肉膏蛋白胨培养基和选择培养基将菌液稀释相同的倍数，在牛肉膏蛋白胨培养基上生长的菌落数目应明显多于选择培养基上的数目，因此，牛肉膏蛋白胨培养基可以作为对照，用来判断选择培养基是否起到了选择作用。由于初次实验，对于稀释的范围没有把握，因此选择了一个较为宽泛的范围：稀释倍数为103～107。每个稀释度下需要3个选择培养基，1个牛肉膏蛋白胨培养基，因此共需要15个选择培养基，5个牛肉膏蛋白胨培养基。; 将10 g土样加入盛有90 mL无菌生理盐水的锥形瓶中（锥形瓶体积为250 mL），充分摇匀，吸取上清液1 mL，转移至盛有9 mL的生理盐水的无菌大试管中，依次等比稀释至107稀释度，并按照由107～103稀释度按照浓度从低到高的顺序涂布平板，不必更换移液管。 ; 将涂布好的培养皿放在30 ℃温度下培养。随着培养时间的延长，会有不同的菌落产生。 比较牛肉膏培养基和选择培养基中菌落的数量、形态等，并做好记录。 挑选选择培养基中不同形态的菌落接入含酚红培养基的斜面中，观察能否产生如课本中图2-10的颜色反应。;;;;　　为什么分离不同的微生物要采用不同的稀释度？测定土壤中细菌的总量和测定土壤中能分解尿素的细菌的数量，选用的稀释范围相同吗？ ;4.细菌的计数;; 关注菌落的形态、大小、边缘、突起、颜色、质地等等，都是区分细菌的重要手段。 ; 关注菌落的形态、大小、边缘、突起、颜色、质地等等，都是区分细菌的重要手段。 ; 关注菌落的形态、大小、边缘、突起、颜色、质地等等，都是区分细菌的重要手段。 ; 关注菌落的形态、大小、边缘、突起、颜色、质地等等，都是区分细菌的重要手段。 ; 关注菌落的形态、大小、边缘、突起、颜色、质地等等，都是区分细菌的重要手段。 ;五、操作提示 ;　　伊红—美蓝培养基是鉴别培养基，可以用来检测自来水中的大肠杆菌是否超标，因为的代谢产物与伊红—美蓝结合，使菌落呈深紫色并带有金属光泽，使大肠杆菌的菌落显示出来，并没有促进大肠杆菌的生长和抑制其他微生物的生长。;大肠杆菌呈 黑色中心 ,有或无金属光泽;七、例题解析 ;　　例2．在微生物群体生长规律的测定中，种内斗争最显著最激烈的时期是 　　A．调整期 　B．对数期 　　C．稳定期 D．衰亡期;　　例3．（2005年江苏）抗生素作为治疗细菌感染的药物，其高效性和巨大的经济价值使抗生素工业经久不衰。其中青霉素的发现和应用具有划时代的意义。 ⑴青霉素发酵产生青霉素。青霉菌的新陈代谢类型是 ，青霉素是青霉菌的 代谢产物。 ⑵在生产和科研中，常选用处于 期的青霉菌作为菌种或研究材料，因为此时的青霉菌代谢旺盛， 和 比较稳定。 ⑶对青霉菌菌体生长情况的测定：取一定体积的发酵液，经离心分离、反复洗涤后， ，再计算发酵罐中菌体的总重量。;　解析： 　青霉菌属于真菌，其代谢类型应为异养需氧型，而青霉素作为它的代谢产物，并不是它生长、繁殖所必需的，所以青霉素应属于次级代谢产物。在测定培养基上青霉菌菌体的生长情况时，常用的方法有两种：一种是测量青霉菌的细胞数目，另一种是测重量，取一定体积的发酵液，经离心分离、反复洗涤后，称菌体的湿重，或烘干后称干重，再由此计算出其中的细胞总重量。在细菌生长的四个主要时期中，因为处于对数期的细菌代谢旺盛，个体的形态