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药理实验方法学 白细胞分化抗原群的检测方法P170 答：(1)免疫组化技术 先以酶标记的抗体与组织或细胞作用，然后加入酶的底物，生成的有色的不溶性产物或具有一定电子密度的颗粒，通过光镜或电镜，对细胞或组织内的相应抗原进行定位或定性研究。 免疫荧光技术 根据抗原抗体反应的原理，现将已知的抗原或抗体标记上荧光素制成荧光标记物，再用这种荧光抗体（或抗原）作为分子探针检查细胞或组织内的相应抗原（或抗体）。 流式细胞技术 使悬浮在液体中分散的经荧光标记的细胞或微利捉个通过样品池，同时由荧光探测器捕获荧光信号并转换成分别代表向前散射角、侧向散射角和不同荧光强度的电脉冲信号，经计算机处理形成相应的点图，直方图和加三维结构图像进行分析。 分析白细胞分化抗原检测的影响因素 流式法检测的影响因素：（1）非特异性结合NSB①Fc受体结合抗体是导致影响检测结果的重要因素，任何细胞上只要存在未结合的Fc受体，都可能有NSB。采用高浓度的纯化IgG可用于阻断Fc受体的NSB。②免疫球蛋白聚集可增加NSB。由于冰冻、复溶和冻干处理，抗体均可出现聚集。对于新购买的抗体，可通过高速离心去除聚集。 简述实验动物血压测定的方法。P140 直接测定法 1.麻醉动物直接测定法（1）麻醉动物直接测定法：麻醉、固定动物、手术视野剪毛、气管插管、动脉插管、血压记录；清醒动物直接测定法（2）简易清醒自由活动大鼠血压测定技术：导管制作、手术操作、连接测压系统、记录血压（生理记录仪记录）：（3）计算机化清醒自由活动大鼠血压测定技术：①采样 、记录和储存：压力信号经换能器转换为电信号，再经放大器输入计算机。②数据处理和结果分析：（4）清醒自由活动大鼠血压遥控测定技术 二、间接测定法 1.容积测定法 （1）大鼠尾容积测定法 大鼠尾根部加压超过收缩压时，血流中断，当压力降低到等于或稍低于收缩压时，血液流入尾部，此时的压力大于静脉压，血液回流受阻，结果尾容积加大，测定该容积突然增加时的瞬间压力，即为收缩压：（2）大鼠足容积测定法 同上；2..脉搏测定法 （1）大鼠尾动脉脉搏测定法 大鼠尾根部加压超过收缩压时，脉搏消失，压力减至收缩压时，脉搏出现，继续减压之舒张压时，脉搏回复加压前水平，检测这种脉搏变化时的瞬间压力，即得血压值。（2）犬颈动脉脉搏测压法 同上；（3）犬胫动脉脉搏测压法 同上（4）犬尾动脉脉搏测压法 同上 简述肾外包扎性高血压模型制备的基本原理和注意事项。P144 原理：肾外异物包扎，可致肾周围炎，在肾外形成一层纤维素性鞘膜，压迫肾实质，造成肾组织缺血，使肾素形成增加，进而使血液中血管紧张素含量增加，血压上升。 注意事项：（1）肾外包扎材料除自制双层乳胶薄膜和玻璃纸外，还可用绸布、乳胶、火棉胶等材料。肾外包扎材应足够紧，但不能勒破组织。（2）如果要制造2肾1扎型，则一侧肾包扎后无需切除另一侧肾，术后3~6月10%~20%动物形成高血压。如果要制造2肾2扎型，则一侧肾包扎后同法包扎另一侧肾，术后3~4周70%以上动物形成高血压。 试述区分中枢降压与外周降压的试验方法。P145 脊髓猫实验 将猫在第二颈椎水平切断脊髓，施行人工呼吸，随后切断两侧迷走神经。如果给药后仍有降压作用，提示作用部位不在中枢，而在外周。如果给药后原有的降压作用消失，提示作用部位在中枢。 降压有效量比较实验 如果以静脉注射最小有效降压计量的1/10量作椎动脉注射或侧脑室注射，仍可引起降压效应时，则可推测该受试药物降压作用为中枢性，否则尾外周性。 交叉灌流实验 通过交叉灌流实验记录受血动物的血压及交感神经活动来分析药物的中枢性心血管作用。受血动物的头部血供由另一供血动物提供，在供血动物注射药物后，若药物通过中枢发挥作用，则受血动物会立即出现类似供血动物的心血管效应和交感神经活动的改变。 发热模型的建立与评价 1.基本原理：发热反应大多是各种致热因子作用于机体，产生和释放内热原，并进一步影响体温调节中枢，使调温起步点提高，体温相应升高。因此，实验室常用有关的刺激因子激活产生内热原。操作方法：1测量体温，系将肛表涂上凡士林，使其润滑后插入动物肛门，兔一般插入3-4cm，大鼠插入2cm，放置3-5min后取出读数。2.引起发热反应包括（1）细菌培养液和内毒素引起的发热。①注射杀死的大肠埃希菌或乙型副伤寒沙门菌培养液②注射伤寒-副伤寒菌苗③注射腐败干草浸剂④注射大肠埃希菌菌液⑤注入伤寒沙门菌内毒素⑥应用啤酒酵母悬液（2）非感染性发热复制法1）化学刺激法：给兔背部注射松节油0.4ml/kg或2%2,4-二硝基酚乙醇溶液亦用1%角叉菜胶0.1ml，于大鼠一侧后足趾皮下注射2）注入异性蛋白给兔肌注10%蛋白栋，剂量1.0g/kg，可在2-3h内引起体温显著升高3）温刺激法（3）实验性发热反应的影响因素①动物特点的影响：不同