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转化、转导与接合转移 最终受体菌 基因转移 重组DNA分子 微生物遗传操作系统 《微生物菌种选育》 Genetic Improvement on Microorganisms 基因转移 转化Transformation: 细胞从环境中摄取DNA。只 有“感受态”细胞才能摄取DNA。 转导Transduction: 病毒感染一个细胞后部分宿主 DNA被包到新生病毒粒子中，该病毒粒子再感染另 一个宿主细胞从而引起基因重组的现象。 接合Conjugation: 一个细菌通过细胞间的直接接触 将DNA转到另外的细菌中，接合需要特殊的质粒辅 助。 转化 Transformation 细菌细胞处于可被DNA转化的状态称为感受态。 处于感受态的细胞表面有DNA受体和其他特异的转化蛋白。 (1) 自然感受态： (()2) 化学感受态： (3) 电转化/电穿孔 (4) 原生质体转化 接合转移 Conjjgugation 指两个细胞通过直接接触或桥状结构进行基因转 移的过程。 接合转移需要利用质粒编码的功能辅助。 http://strubi.uni-graz.at/projects/index.html 接合转移质粒 Conjugative plasmid 含有接合转移质粒的细菌才能发生接合转移。 大肠杆菌F质粒 大肠杆菌RK2/RP4质粒 农杆菌Ti质粒 接合转移的基本元件 1. 接合起始区origin of transfer ( oriT or mob) ：位于待接合 的质粒上。 2. 接合转移基因(tra genes): tra基因可以位于待接合的质粒上，也可以位于供体菌的另 一个质粒，甚至可以位于细菌基因组上 。 转 导 Transduction 细菌利用噬菌体通过转导作用 将基因组DNA转 移到另一个细菌中 。 转染Transfection 当细菌的转化过程中吸收的外源DNA是病毒DNA时此过 程就应该称为转染。区别于“感染”，后者指病毒颗粒借助 于胞外受体吸附到细胞，并将DNA注入细胞。 而对于真核生物，转染就是原核生物中转化的同义词。 之???以在真核生物中使用“转染” 这个词来代替“转化”， 是因为人们之前已经习惯了用转化这个词表示真核细胞变为 恶性细胞的过程。 原生质体及 原生 质体融合 《微生物菌种选育》 Genetic Improvement on Microorganisms 原生质体概念 Protoplast: 用溶菌酶除尽原有细胞壁或用青霉素抑制细胞壁 的合成，所留下的仅由细胞膜包被着的脆弱细 胞，主要是G+ 菌 Sppphaeroplast: 还残留有部分细胞壁的原生质体，主要是G- 菌 广义概念： 实验室条件下脱掉部分或全部细胞壁的植物、真菌、细菌细胞。 链霉菌菌丝 原生质体 Hopwood,2007 原生质体特点： 1. 无细胞壁。 2. 球形。 3. 脆弱。 4. 对渗透压敏感。 高渗的溶液将导致原生质体缩小。 低渗导 致原生质体破裂。 等渗溶液！！！！ 细菌去壁： 细菌细胞壁主要为肽聚糖. ?加甘氨酸/青霉素培养