控制菌检查法.pdf

第三次公示稿? 1106非无菌产品微生物限度检查：控制菌检查法 控制菌检查法系用于在规定的试验条件下，检查供试品中是否存在特定的微 生物。 当本法用于检查非无菌制剂及其原、辅料等是否符合相应的微生物限度标准 时，应按下列规定进行检验，包括样品取样量和结果判断等。 供试品检出控制菌或其他致病菌时,按一次检出结果为准,不再复试。 供试液制备及实验环境要求同“非无菌产品微生物限度检查：微生物计数法 （通则 1105）”。 如果供试品具有抗菌活性，应尽可能去除或中和。供试品检查时, 若使用了 中和剂或灭活剂，应确认有效性及对微生物无毒性。 供试液制备时如果使用了表面活性剂，应确认其对微生物无毒性以及与所使 用中和剂或灭活剂的相容性。 培养基适用性检查和控制菌检查方法适用性试验 供试品控制菌检查中所使用的培养基应进行适用性检查。 供试品的控制菌检查方法应进行方法适用性试验，以确认所采用的方法适合 于该产品的控制菌检查。 若检验程序或产品发生变化可能影响检验结果时，控制菌检查方法应重新进 行适用性试验。 菌种及菌液制备 菌种 试验用菌株的传代次数不得超过 5 代（从菌种保藏中心获得的干燥菌 种为第 0 代），并采用适宜的菌种保藏技术进行保存，以保证试验菌株的生物学 特性。 金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)〔CMCC（B）26 003〕 铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa)〔CMCC（B）10 104〕 大肠埃希菌(Escherichia coli)〔CMCC（B）44 102〕 乙型副伤寒沙门菌(Salmonellaparatyphi B)〔CMCC（B）50 094〕 白色念珠菌(Candida albicans)〔CMCC（F）98 001〕 生孢梭菌（Clostridium sporogenes）〔CMCC（B）64 941〕 第三次公示稿? 菌液制备 将金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、大肠埃希菌、沙门菌分别接 种于胰酪大豆胨液体培养基中或在胰酪大豆胨琼脂培养基上，30～35℃培养 18～24 小时；将白色念珠菌接种于沙氏葡萄糖琼脂培养??上或沙氏葡萄糖液体 培养基中，20～25℃培养 2～3 天；将生孢梭菌接种于梭菌增菌培养基中置厌氧 条件下 30～35℃培养 24～48 小时或接种于硫乙醇酸盐流体培养基中 30～35℃培 养 18～24 小时。上述培养物用 pH7.0 无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液或 0.9%无菌氯 化钠溶液制成适宜浓度的菌悬液。 菌液制备后若在室温下放置，应在 2 小时内使用；若保存在 2～8℃，可在 24 小时内使用。生孢梭菌孢子悬液可替代新鲜的菌悬液，孢子悬液可保存在 2～ 8℃，在验证过的贮存期内使用。 阴性对照 为确认试验条件是否符合要求，应进行阴性对照试验， 阴性对照试验应无 菌生长。如阴性对照有菌生长，应进行偏差调查。 培养基适用性检查 控制菌检查用的成品培养基、由脱水培养基或按处方配制的培养基均应进行 培养基的适用性检查。 控制菌检查用培养基的适用性检查项目包括促生长能力、抑制能力及指示特 性的检查。各培养基的检查项目及所用的菌株见表 1。 表 1 控制菌检查用培养基的促生长能力、抑制能力和指示特性 控制菌检查 培养基 特性 试验菌株 耐胆盐革兰 肠道菌增菌液体培养 促生长能力 大肠埃希菌 阴性菌 基 铜绿假单胞菌 抑制能力 金黄色葡萄球菌 紫红胆盐葡萄糖琼脂