微生物培养基的配制与灭菌.pdf

微生物培养基的配制与灭菌 大连理工大学环境与生命学院 实验目的 1.掌握培养基配制的基本原则和制备方法 2.掌握高压灭菌技术 实验仪器 高压灭菌锅 实验原理 培养基是根据微生物生长繁殖的需要，用人工 方法将各种营养物质按一定的比例配制而成。其中 主要含有水分、碳水化合物、含氮化合物、无机盐 以及维生素等。 制备微生物培养基应遵循以下基本原则： （1）根据不同微生物的营养需要，配制不同的培养 基，如培养细菌可采用LB培养基，培养放线菌 实验原理 可采用查氏培养基，培养霉菌或酵母菌常采用 米曲汁或麦芽汁培养基。 （2）注意各种营养物的浓度与配比；其中以C：N比 和C：N：P比最重要。 （3）根据微生物的需求，加适量的缓冲剂，使培养 基的pH控制在一定的范围内。 实验原理 （4）尽量利用价廉且易于获得的原料作为培养基 成分。 在接种微生物之前，必须事先杀死培养基和一 切用具中的微生物，然后以无菌操作将所需要的菌 种接入，才能获得纯培养。 实验原理 机械灭菌法 高温 灭菌的方法 物理灭菌法 紫外线 超声波… 化学灭菌法 其中高压蒸汽灭菌法是一种用途最广、效率最 高的灭菌方法，适用于培养基、玻璃器具及医疗工 具等的灭菌。 实验步骤 （1）LB培养基的制备方法 ①按LB培养基配方，分别称取各成分放于烧杯中。 ②加一定量水于烧杯中搅拌，待完全溶解后，补足 所需水。 ③用滴管逐滴加入10% NaOH至烧杯中，pH调到7.0。 实验步骤 ④用双层纱布滤掉渣子，所得滤液为LB培养基。 ⑤将LB培养基分装到10mL试管中，每个试管中放入 3mL培养基，用棉塞封口。 ⑥用牛皮纸包好进行灭菌，待冷却后取出。 实验步骤 （2）LB培养基灭菌的操作方法 ①打开灭菌锅盖，向锅内加入适量的水。 ②将待灭菌物品放入锅内，然后加盖旋紧螺栓、密 闭蒸汽锅，切勿漏气。 ③打开放气阀，加热至水沸腾，冷空气排尽后，再 关紧放气阀。 实验步骤 ④加热升温，待压力逐渐上升至所需压力时，控制 热源，维持所需时间（121℃、20～30min），然 后停止加热。 ⑤待压力降至0时，松动螺栓、打开锅盖，取出灭菌 物，（压力未降至0时，切勿打开锅盖）。 思考题 （1）在固态培养基配制中，琼脂和蛋白胨的主要作 用是什么？ （2）按照原理划分，灭菌有几种方法？