实验4 细菌质粒的接合转移.pptVIP

实验四 细菌质粒的接合转移 ;一：目的要求;二：基本原理;;1．转移型质粒：多为低拷贝的大质粒，含有完整的转移操纵子基因（tra）和转移起始位点。能在同种或亲缘关系近的菌体细胞间进行转移。例如： 大肠杆菌：F因子、R1、R100、R6K、RP4…… 天蓝色链霉菌：致育性因子pSCP1、pSCP2…… 2．非转移型质粒：多为高拷贝的小质粒，如大肠杆菌的ColE1、RSF1010等。由于缺少转移基因（tra），不能自主转移，但由于含有与F质粒类似的bom（或nic）位点或诱动基因mob（mobilization），因而能被带有tra基因的转移性质粒诱动而发生转移。 ;;;转移子的筛选;三：实验菌株;四：实验内容 ;用可调定量移液器吸取供体、辅助菌各 0.4ml，吸受体菌0.6ml，都加入同一eppdorf管内（每个同学做1管），放入离心机内，10000转/min 离心1分钟。 倒上清，向沉淀加 1ml 的 TY液体，用 tip上下抽吸，洗涤菌体，再10000转/min离心1分钟，倒上清，留100μl左右用于悬浮菌体。 倒TY平板，然后用镊子取灭菌滤纸片贴于已准备好的TY平板上（每2个同学1片，2-3片/平板）。用200μl的 tip 抽吸eppdorf管内沉淀的菌体，打散成浓菌液，将之加到滤纸片中央（切勿倾斜平板，以免菌液流出滤纸片以外）,吹干。 28℃培养2天。 ;倒SM平板;向灭菌青霉素瓶中加3ml无菌水，将已培养的TY平板上的滤纸片用无菌镊子放入水中，在震荡混匀器上洗菌体，充分打散。 向1ml的ep管加 0.9mL无菌水，取0.1ml菌液，混匀。 吸取 200μL涂皿。 少数同学另取稀释液，涂1板不加Tc的SM做对照 。 平板放28 ℃培养4-6天后看结果。;五：实验报告内容;六：思考题