男性学实验室检查与质控.pptVIP

王振强 zhen-qiang wang; 不育症的发生率为10％－15％，其中约30％由于男性因素引起的，统称为男性不育症。 男性不育症患者大部分没有明显的临床症状。 实验室检测是评价男性生殖能力的重要手段。 ; 量 2.0ml或更多 PH 7.2或更多 精子密度 20×106／ml或更多 总精子数 40×106/一次射精或更多 活力 射精后60分钟内，50％或更多具有前向运动 （即a+b级），或25％或更多具有快速前向运动（a级） 畸形率 ＜ 85％ 存活率 50％或更多存活 白细胞 ＜1×106／ml 该指标参考《WHO人类精液及精子宫颈粘液相互作用实验室检验手册（第四版） ; 正常精子状态 射出的精液符合参考值 少精子症 精子浓度低于参考值 (精子密度20×106／ml或总精子数40×106/一次射精) 弱精子症 精子活力低于参考值(a+b级50％或a级25％) 畸精子症 具有正常形态的精子少于参考值(正常形态15%) 少、弱、畸精子症 表示3种变量均异常（两种变量异常时，可用两个前缀） 无精子症 所射精液中无精子 无精液症 不射精; ;;;;;; 精子顶体酶测定 顶体酶存在于精子顶体内膜及赤道部膜上， 是受精过程中重要的蛋白水解酶. 当精子头部进入卵透明带，顶体酶原被活化为顶体酶水解卵透明带，使精子穿过卵透明带最终与卵子融合。 顶体酶活性反映精子质量，顶体酶活力不足可能导致不育。临床精子成活率低、死精子症以及严重生殖系统感染，特别是溶脲支原体严重感染时可造成精子顶体酶活性降低。 顶体酶活性是判断男性精子功能和生育力强弱的重要评价指标。;男性学组合项目;前列腺分泌功能指标 精浆锌：与精子活力、抗氧化及前列腺分泌功能有关 精浆柠檬酸：与前列腺分泌功能，精液液化有关 精浆酸性磷酸酶:与前列腺炎有关 精子顶体酶活性定量检测 判断男性精子功能和生育力强弱的重要评价指标，顶体酶活性降低精子将难以穿透卵细胞从而导致不育。 核蛋白组型转换 蛋白组型转换缺陷或异常可引起男性不育或胚胎早期夭折流产。;精子体外处理方法： 洗涤法 上游法 密度梯度离心法;洗涤法 目的：增加活动精子密度和洗去精浆中影响精子活力的物质，如白细胞、细菌、抗精子抗体等。 方法： 选用Ham’s F10、HTF、Earle’s等上述任何一种培养液，加10％血清及抗生素。 液化精液移于15ml锥形离心管内，加3倍剂量的培养液。 离心500g×8’，弃上清夜，同法重复洗涤一次。 留沉淀加入0.5ml培养液，制成精子悬液，密度调整为40×106/ml;上游法 目的： 利用活动精子具有主动游过液体界面进入不同培养液的能力，而达到自行与死精，凝集精子，畸形精子和细胞杂质分离。 适用于正常精液\液化不良精液。 方法： 液化精液1：3加入培养液，离心200g×8’，洗涤2次。 留沉淀加入0.5ml培养液，制成精子悬液。 取另一支试管加入1ml培养液，将0.5ml精子悬液慢慢加入试管底部，形成上下二个两面。 5％CO2、37℃孵箱内静置1h。 收集上游精子，备用;密度梯度离心法 目的：利用不同成熟阶段的精子和各种细胞成分各自的密度，差异使之在不同浓度的溶液中，在离心力作用下停留在不同密度面的界面上，达到较好的分离。适用于精液粘稠、严重少精 弱精症。 *标准二层Puresperm法(80%、40%) 方法 在锥形离心管底依次加入1.5－2ml 80％、40％ Puresperm液。 将2ml精液加到40％ Puresperm液界面上，离心300g×20” 弃上层液体、留沉淀物、加5ml Puresperm wash、离心500g×10’同法洗涤2次 留沉淀物，加0.5ml SpermAssist制成精子悬液备用。;精液分析在男性生殖力的评估中 起着极为重要的作用,但是不同实验室 测同一份样本的结果常有较大差异 这说明男性学实验室各项指标 的质控是结果可信度的保证;男性学实验室质量控制规则 随时――样本结果的监测和对比； 每周――分析不同技术员所做的主要精液 指标的重复测量值； 每月――分析检测结果的月均值； 每季――校正加样器； 每年――校正计数板和其他设备。; 　 质控图的基本控制原则 控制原则