大蒜多倍体诱导的实验设计方案.docVIP

大蒜多倍体诱导的实验设计方案 一、实验目的及原理： 目的：了解人工诱导多倍体的原理，学习用秋水仙素诱发多倍体大蒜的方法，学习识别多倍体植物的形态特征及其细胞学特点。从而掌握了人工诱导多倍体植物的方法并学会了利用染色体分析方法对多倍体细胞做出准确判断。 原理：秋水仙素与正在分裂的细胞接触后，可抑制微管的聚合过程，不能形成纺锤丝，使染色体无法分向两极，从而产生染色体加倍 二、提出假设 假设：用0 .05 % 、0 .1% 、0.15%、0.2%等不同梯度浓度的秋水仙素，诱导大蒜根尖的人工效果不同。 预期：浓度为0. 15%的秋水仙素处理的大蒜根尖细胞加倍效果最好。 三、实验具体设计 (１)实验变量是秋水仙的不同浓度，因此在处理大蒜根尖时的时间，处理的环境应相同。 (２)实验目的探究秋水仙素对植物细胞的最适加倍浓度，以蒸馏水培养植物作为对照组。 (3)实验人员分配： 　本组成员　 　　　 做空白对照组和0.１５%的秋水仙素处理的大蒜根尖加倍 　　　 　0.０５%的秋水仙素处理的大蒜根尖加倍 　　　 0.１%的秋水仙素处理的大蒜根尖加倍 　 0.２%的秋水仙素处理的大蒜根尖加倍 (4)由于秋水仙素有毒，在操作过程中应该小心谨慎，避免将秋水仙素溅到皮肤上。处理的材料在弱光或疑难的条件下处理。（秋水仙素有毒） 四、实验材料、仪器及试剂 (１)材料: 在市场购买的普通大蒜。大蒜根尖（2n=16）， (２)仪器：显微镜，载玻片，盖玻片，培养皿，镊子，刀片，滴管，吸水纸，烧杯，电脑，解剖针 (3)试剂：不同浓度的秋水仙素溶液（0 .05 % 、0 .1% 、0.15%、0.2%）、卡诺固定液、1mol／L HCl溶液、醋酸洋红、乙酸、75%医用酒精 五、实验方法 (１)材料预培养：将饱满大蒜蒜瓣去皮后,经消毒后， 插入含有蒸馏水的烧杯中,室温（25℃）下培养 ，待根尖长至2 cm 左右时将蒜瓣取出, 挑出生长良好的蒜瓣作为多倍体诱导的材料和对照材料。 (２)秋水仙素处理：用饱含浓度分别为0 .05 % 、0 .1% 、0.15%、0.2%秋水仙素溶液和作为对照含有等量蒸馏水的培养皿培养24h，每一组合处理4到5个蒜瓣。 秋水仙素的浓度（c） 0.0５% 0.１% 0.１5% 0.２% 秋水仙素的体积（ml） 0.0５ 0.１ 0.１5 0.２ 蒸馏水体积（ml） 99.95 9９.90 99.８5 99.80 (３)制玻片：在8 :00 ～9 :00 切取幼嫩根尖, 用自来水洗净, 将根尖切下，放在固定液（无水乙醇—冰醋酸 3∶1) 中固定24 h, (４)保存：将卡诺氏固定液倒出，清水洗两遍，将根尖上乙酸洗净，转存入75%医用酒精，4℃保存。 (５)解离：固定后的材料用蒸馏水漂洗3 次, 每次2min,，用1MHCl在60℃水浴中恒温处理5-10min，然后水洗3次。 (６)染色： 切取根尖分生组织区，用醋酸洋红染色10 min。 (７)压片：将染色后的材料盖上盖玻片，在盖玻片上盖上两层吸水纸，用一个双面刀片，插到盖片与载片之间的一角，用左手食指压紧盖片，防止滑动，用右手持解剖针，用针柄轻敲盖片，使材料均匀分散开。然后将刀片轻轻撤出，再用针柄重敲盖片，使细胞分散压平。 (８)镜检：镜检时先用低倍镜进行观察，找到好的视野后再转用高倍镜观察。 六、预期结果 结果：由实验组与空白试验作对比可知用0.１５%的秋水仙素诱导大蒜多倍体的效果最好。浓度过高或过低都对大蒜根尖诱导加倍效果不佳。 分析：不同梯度的秋水仙素浓度对大蒜多倍体的诱导效果不同，最适浓度的秋水仙素对大蒜多倍体的诱导效果最好， 0.１５%的秋水仙素浓度诱导大蒜多倍体的效果最好，在一定浓度范围内，随着秋水仙素浓度的增加，诱导效果明显增加，多倍体的数目明显增加，在最适浓度时多倍体数目最多，超过最适浓度以后，随着秋水仙素浓度的增加，诱导多倍体的效果又会下降。 参考文献 (１)彭静,魏岳荣,熊兴华.植物多倍体育种研究进展[J].中国农学通报,2010,(第11期). (２)池坚,席梦利,张静,胡凤荣,施季森.东方百合Siberia多倍体诱导及其细胞学鉴定[J].分子植物育种,2008,(第2期). (３) 张素芝, 李纪蓉. 秋水仙素诱导大蒜四倍体的研究[J] . 核农报,2006 ,20(4) :303 - 308 .