血液分子生物学检验.ppt.ppt

第三临床医学院临床检验教研室 程真珍 2学时;教学目的与要求;;一、核酸分子杂交技术 具一定同源性的两条(DNA或RNA)单链在适宜的温度及离子强度等条件下, 可按碱基互补配对原则特异性地复性，形成双链。;DNA—DNA杂交分子;Southern印迹杂交;（a）;Northern杂交;蛋白质印迹(Western bloting); 印迹技术的类别及应用;核酸原位杂交;;探针DNA;二、聚合酶链反应技术;1.聚合酶链反应技术的原理;;以上为一个循环。在下一轮循环中，DNA双链再经变性、退火、延伸三步, 模板DNA数量翻一倍(假设扩增效率为100%)。如此反复循环，便可使DNA以指数形式进行扩增。每完成一个循环需2~4min， 2~3h就能将待扩目的基因扩增放大几百万倍。到达平台期（plateau）所需循环次数取决于样品中模板的拷贝数。;2.PCR产物分析;表4.1 琼脂糖浓度与分离线状DNA的有效范围;表6.2 丙烯酰胺浓度与分离DNA分子的有效范围;PCR产物分析;PCR产物分析;PCR产物分析;三、基因芯片技术;基因芯片扫描结果图;; 用于基因功能的研究。原理：用不同的荧光染料通过RT-PCR标记不同来源的细胞mRNA制备成探针，将探针混合后与芯片上的基因杂交、洗涤、扫描，得到这些基因在不同组织或个体中的表达谱，再通过计算机分析这些基因在不同组织或个体中的表达差异，得出这些基因表达的重要信息。即： （1）高表达 （2）低表达或不表达;HBV、HCV、结核杆菌等病原体检测，商检等。;;SNP的特征 SNP是人类可遗传的变异中最常出现的一种，占所有已知多态性的90%以上，在人类基因组中广泛存在，人类DNA中每300-1000bp就有一个SNP. 因此，一个人类个体大约携带300万-1000万个SNPs。 ;SNP的检测方法;七、应用评价;应用评价;第七节 流式细胞分析;流式细胞仪的特点;流路 (液流系统） 流动室 鞘液SHEATH 样本流SAMPLE 单细胞悬液5*105~1*106个/ml 光路（光学系统） 光源 滤片 电路（检测系统） 光电倍增管PMT 放大电路HV及GAIN 增益 A/D转换 统计 （分析系统） 计算机;流动室;常用荧光染料介绍;信 号;散射光信号 —— 细胞大小及颗粒性;结果表示;2. 双参数二维点图;3. 等高线图 4. 密度图;三维图;FCM的临床应用;FCM的应用——血液病学;FCM的科研应用;;小 结;