柠檬酸产生菌选编.ppt

微生物发酵工程部分;生物技术专业系统实验二（微生物发酵工程部分） ;微生物发酵工程; 微生物发酵工程是一门利用微生物科学和工程学的原理去研究微生物在生物反应器中工艺特点和生长规律的学科。主要研究微生物细胞中复杂的生物化学反应，控制生物合成或降解、大规模地生产预期的产物，达到特殊的目的。其应用范围广泛，包括医药、食品、粮食、饲料、农业、林业、化工、化纤、冶金、能源、环保等方面。 微生物发酵工程实验是在学习了有机化学、微生物学相关知识、微生物发酵工程中的工艺设备后，并具备一定的实验动手能力基础上，通过微生物发酵工程实验课程的教学，使学生了解并掌握微生物发酵工程中所涉及的发酵工艺、设备、分析等几方面的知识及实验技能。 ;Ⅰ 柠檬酸产生菌的分离、发酵、分析、提取及检测（好氧发酵部分）;柠檬酸生产介绍;实验的总体路线;实验一 柠檬酸产生菌的分离及初筛;实验目的：;实验原理：; 3、黑曲霉耐酸性较强，在pH值1.6时仍能良好生长。利用其产酸高、耐酸强的生理特征，使用pH1.6的酸性营养滤纸分离该菌，简单易行，再加上用变色圈法进行初筛，使产柠檬酸的菌株更易被选出。 4、黑曲霉产生的柠檬酸,可利用Deniges氏液鉴别；其产酸量可用0.1N氢氧化钠滴定。;1、土壤采样 2、准备稀释分离用的器材 3、将平皿、吸管包好后干热灭菌 4、配制察氏培养基 5、做成固体斜面;6、配成蓝色的察氏-多民培养基 7、湿热灭菌 8、摆斜面、倒平板 9、稀释土样 10、涂布均匀 11、倒置培养。 ;变色圈反应;1、配制初筛发酵培养基并灭菌 2、观察菌落 3、挑选菌落变色圈，测量变色圈与菌落直径之比，取比值较大者 4、将选好的菌株编号，接入斜面。同时采用倒置接种法在培养皿上点植接种 5、培养斜面和平皿 6、摇瓶发酵 7、柠檬酸鉴定 8、产酸量的测定。;1.简述从土壤中筛选产目的产物微生物菌种的过程。 2.土壤采样时应注意的哪些问题？ 3.黑曲霉柠檬酸产生菌菌株的富集应考虑利用哪些特点来进行富集？ ;实验二 柠檬酸产生菌的复筛;实验目的：;初筛选出的菌株必须进行摇瓶发酵复筛，复筛不是初筛简单的重复。 复筛的主要目的： ①考查菌株生产能力的自然波动范围； ②复筛的菌种经过斜面传代，在摇瓶复筛中考查菌种的传代稳定性； ③选出稳定、高产的菌株。 ;1. 将各菌种的孢子接种蔗糖培养基中，同时作对照实验 2.将实验组和对照组摇瓶振荡发酵培养 3.发酵结束后，测定并计算出空白对照和各菌种的平均产酸率 4.选取产酸率高且稳定的菌株;1.为什么在平板初筛中有些菌落透明圈或显色圈很大，但摇瓶发酵试验结果产酸甚低？ 2.复筛中应该注意那些事项。;实验三 应用正交实验法优选柠檬酸产生菌的最佳发酵培养基;实验目的;正交设计是利用一套规格化的表格—正交表，科学合理地安排试验。这种设计的特点是在试验的全部处理组合中，仅挑选部分有代表性的水平组合进行试验。通过这部分试验了解全面试验情况，找到较优的水平组合。 正交表是正交设计的基本工具。在正交设计中，安排试验，分析结果，均在正交表上进行。 ;;1.确定试验因素和水平数 根据试验的目的确定试验要研究的因素。为提高柠檬酸产生菌的产酸率， 据资料查阅或经验，常用的柠檬酸发酵培养基为：蔗糖15%，NH4NO30.2%，KH2PO4 0.1%，MgSO4·7H2O 0.25%。将其定为基础发酵培养基，并以它确定了四个因素，每个因素各三个水平，如下表所示… 2.选用合适的正交表 根据试验因素和水平数的多少以及是否需要估计互作来选择合适的正交表。如下表所示： ;因素水平表;L9(34)的正交表;3.根据正交表的培养基配方配制不同的培养基 4.正交实验结果测定 5.发酵结束后，测定每组培养基的平均产酸量,并填入正交表中，以便分析使用。;正交试验结果分析:极差法（直观分析法）;（2）计算各因素同一水平的平均值 如： a1 = A1/3 a2 = A2/3 a3 = A3/3 其它因素同样计算 （3）计算极差R值，决定因素的主次顺序。R值是各因素同一水平的平均值中最大值减最小值之极差。如： A因素 Ra = a中最大—a中最小 B因素 Rb = b中最大—b中最小 C因素 Rc = c中最大—c中最小 D因素 Rd = d中最大—d中最小 比较Ra、Rb、Rc、Rd的大小，确定并排列主、次要因素。 ;为直观起见，用各因素的水平作横坐标，指标的平均产酸量为纵坐标，画出因素各水平与指标的关系图。 平均产酸量(g/100ml) A1 A2 A3 B1 B2 B3 C1