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微生物的无菌操作及接种技术 2016.10 西安 微生物无菌操作及接种技术 ? 微生物无菌操作技术 ? 接种技术 微生物无菌操作技术 无菌操作技术：指在微生物实验工作中，控制或防止各类微生 物的污染及其干扰的一系列操作方法和有关措施。 无菌操作目的： ? 保证待检物品不被环境中微生物污染； ? 防止被检微生物在操作中污染环境或感染操作人员。 无菌操作材料 ? 接种工具 1．接种针 2.接种环 3.接种钩 4.5.玻璃涂棒 6.接种圈 7.接种锄 8.小解剖刀 无菌操作材料 ? 材料 ? 器械和用品：酒精灯、记号笔、标签、火柴、灭菌培 养皿、无菌水、试管架 ? 菌种 ? 培养基： 微生物无菌操作技术与接种技术 ? 无菌技术：指在微生物实验工作中， 控制或防止各类微生物的污染??其 干扰的一系列操作方法和有关措施。 ? 接种：将微生物接到适于它生长繁 殖的人工培养基上或活的生物体内 的过程。 微生物接种技术 ? 接种的准备工作 ? 无菌环境的要求与保持 ? 进入无菌室前的准备 ? 无菌操作的要求 ? 接种的操作方法 接种的准备工作 无菌环境的要求与保持 无菌室 无菌环境 超净工作台 无菌环境的要求与保持 1、无菌室 （1）无菌室的结构： ? 应有更衣间、缓冲间、 操作间 ? 应有良好的通风条件， 安装空调设备及过滤设 备 无菌室的结构 无菌环境的要求与保持 （2）无菌室的消毒和防污染 ? 无菌室内空气测试应基本达到无菌。 ? 每日（使用前）紫外线照射（1~2小时）. ? 每周用甲醛、乳酸、过氧乙酸熏蒸（2小时）. ? 每月用新洁尔灭擦拭地面和墙壁一次的方式进行消毒。 ? 定期作实验室沉降菌计数，以检查无菌室微生物生长繁殖 动态。 无菌环境的要求与保持 2、超净工作台 超净工作台是为实验室工作提供无菌操作环境的设施，以 保护实验免受外部环境的影响，同时为外部环境提供某些程 度的保护以防污染并保护操作者。 原理：超净工作台的洁净环境是在特定的空间内，洁净空 气(进滤空气)按设定的方向流动而形成的。以气流方向来分， 现有的超净工作台可分为垂直式，由内向外式以及侧向式。 垂直流超净工作台 垂直流超净工作台 水平流超净工作台 无菌环境的要求与保持 超净台的使用与维护 ? 风速保持在0.32-0.48米/秒 ? 使用前打开紫外灯照射40~60min ? 开启超净工作台工作电源，关闭紫外灯，并用75%的酒精或0.5%过氧乙 酸喷洒擦拭消毒工作台面。 ? 使用中，有机玻璃罩受到污染，严禁用酒精棉球擦拭，请用含水棉布檫拭； ? 请保持超净台整洁、干燥，不要堆积杂物； ? 使用完毕，关闭煤气开关或酒精灯； ? 使用完毕后，用消毒液擦拭工作台面，关闭工作电源，重新开启紫外灯照 射15min. ? 定期做无菌试验，以测定净化台是否符合无菌要求。 无菌环境的要求与保持 3、无菌器材准备 ? 灭菌器材：玻璃器皿、培养基、无菌衣等. ? 消毒器材：接种试管、无菌室内的凳子、试管架、天平、 工作台等 进入无菌室前的准备 （1）定期检查无菌环境的空气是否符合规定； （2）用紫外线灭菌处理30~60min； （3）检查无菌器材是否完备； （4）实验人员进入无菌室前先用肥皂洗手，然后用75％酒 精棉球将手擦干净。 （5）缓冲室内换上洗净并经紫外线灯照射过的工作衣、帽、 鞋。 无菌操作要求 （1）在操作中不应有大幅度或快速的动作； （2）使用玻璃器皿应轻取轻放。 （3）在火焰上方操作； （4）接种用具在使用前、后都必须灼烧灭菌； （5）在接种培养物时，协作应轻、准。 （6）不能用嘴直接吸吹吸管。 （7）带有菌液的吸管、玻片等器材应及时置于盛有5%来苏尔溶液的 消毒桶内消毒。 无菌操作要求 无菌操作要求 （二）接种的操作方法 ? 接种的基本程序 ? 常用接种方法 ? 斜面接种 ? 划线接种 ? 液体接种 ? 穿刺接种 （二）接种的操作方法 1、接种的基本程序 灭菌接种环 杀灭接种环沾染的微生物，以免污染标本