天然藥物層析分离PPT.ppt

第六节　层析分离;色谱起源;一、层析分离法的基本原理;二、层析分离法的分类;吸附层析：利用吸附剂表面对不同组分吸附性能的差异。 分配层析：利用不同组分在流动相和固定相之间的分配系数的不同。 离子交换层析：利用不同组分对离子交换剂亲和力的不同。;凝胶层析：利用某些凝胶对于不同分子大小的组分阻滞作用的不同。 亲和层析：利用不同组分与配基之间所具有的专一而可逆的亲和力，使生物分子分离 层析聚焦：将两性物质的等电点特性与离子交换层析相结合，使组分分离。 ;柱层析：将固定相装于柱内，使样品沿一个方向移动而达到分离。 纸层析：用滤纸做液体的载体，点样后，用流动相展开，以达到分离鉴定的目的。 薄层层析：将适当粒度的吸附剂铺成薄层，以纸层析类似的方法进行物质的分离和鉴定。;Column Chromatography;;Evaluation only. Created with Aspose.Slides for .NET 3.5 Client Profile 5.2.0.0. Copyright 2004-2011 Aspose Pty Ltd.;记录仪;低温层析柜;蛋白质定量-——分光比色仪(A280)法 蛋白质分子中的色氨酸、酪氨酸和苯丙氨酸残基（主要是色氨酸Trp和酪氨酸Tyr 的共轭双键）对紫外光有吸收，以色氨酸吸收最强，最大吸收峰为280nm。 ;在波长280nm具有吸光的氨基酸;紫外吸收法;;层析操作; 1. 原理 利用固定相的吸附剂表面对不同组分吸附力的大小及洗脱液对它的解吸作用的差异进行分离。吸附力弱而解吸力强的物质，移动快，先洗脱出来；反之则移动慢，后洗脱出来。 ;Evaluation only. Created with Aspose.Slides for .NET 3.5 Client Profile 5.2.0.0. Copyright 2004-2011 Aspose Pty Ltd.;2、洗脱方法;吸附作用的强弱主要与吸附剂和被吸附物质的性质有关。 吸附层析的关键是吸附剂和洗脱剂的选择。;吸附剂吸附剂通过范德华力、静电引力、疏水作用等与待分离物质的极性官能团作用。 1）吸附剂的类型： 根据吸附能力强弱分为： 弱吸附剂：蔗糖、淀粉 中等吸附剂：碳酸钙、磷酸钙、硅胶等 强吸附剂：氧化铝、活性炭;　酶分离中常用的有：活性炭、硅藻土、羟基磷灰石等。 　　　这些吸附剂在低PH值、低离子强度下，对酶有较强的吸附作用，在提高PH值、增加离子强度的条件下，酶可被解吸而洗脱下来。 ;2）吸附剂的性质： 活性炭：常用的吸附剂。 硅胶：常用的极性吸附剂。 羟基磷灰石 （HA） [Ca10(PO4)6.(OH)2] : 微晶型的磷酸钙制品，表面有Ca2+和PO43-两种带电基团； 酸性和中性蛋白质可与Ca2+结合；碱性蛋白质可与PO43-结合。 吸附原理是HA的Ca2+与蛋白质的负电荷基团作用。 ;3）吸附剂的选择： 吸附剂的选择根据相似相溶原则： 极性强的吸附剂易吸附极性强的物质； 非极性的吸附剂易吸附非极性的物质； 溶液中溶解度越大的物质越难被吸附； 但为了便于解吸附，对于极性强的物质通常选用极性弱的吸附剂进行吸附。 ;;（二）分配层析;　　　利用离子交换剂上的可解离基团（活性基团)对各离子的亲和力不同而将物质分离的层析分离方法;根据待分离物质带电性质不同而将物质分离 平衡常数（分配系数）K＝组分离子在离子交换剂上的浓度/组分离子在溶液中的浓度 K值大的后洗脱下来，K小的先洗脱下来.带电荷量少，亲和力小的先被洗脱下来，带电荷量多，亲和力大的后被洗脱下来;1）离子交换剂： 离子交换剂由载体、电荷基团和反离子构成。; 化学原料合成 ：树脂类物质 载体 天然材料制成： cellulose sephadex sepharose (纤维素　葡聚糖　凝胶) 阳离子交换剂: 电荷基团（－）, 反离子（＋） 电荷基团　　　　如： CM-Sepharose 　　　　　　　　　　　（CM：羧甲基） 阴离子交换剂: 电荷基团（＋）, 反离子（－） 　　　　　　如：DEAE-纤维素 　　　　　（DEAE：二乙基氨基乙基）;离子交换剂;2）两种离子交换剂; 离