第二章 微生物的纯培养和显微技术1幻灯片.pptVIP

;基本概念;3、菌落（colony): 单个微生物在适宜的固体培养基表面或内部生长、繁殖到一定程度形成的肉眼可见、有一定形态结构的子细胞生长群体。 4、无菌技术 （aseptic technique） 在分离、转接及培养纯培养物时防止其被其他微生物污染的技术被称为无菌技术 ;第一节 微生物的分离和纯培养;注意事项： 排净冷空气； 灭菌终了，缓慢降压； 灭菌结束，趁热取出物品。;3、接种操作;无菌操作箱 ;二、用固体培养基获得纯培养;1、涂布平板法（Spread Plate method）;2、稀释倒平板法 ;3、平板划线分离法（Streak Plate）;4、稀释摇管法（厌氧培养法） ;; 将待分离的样品进行连续稀释得到高度稀释的效果, 如果经过稀释后的大多数试管中没有微生物生长,那么有微生物生长的试管得到的培养物可能就是由一个微生物个体繁殖而来的纯培养物. 这种方法适合于细胞较大的微生物.;四、单细胞（单孢子）分离法;五、选择培养;1、选择平板培养 根据微生物的特点，在培养基中加入一些抑制剂，使不需要的菌不生长，需要的菌生长后有一定特征，然后挑取单菌落。 分离抗生素抗性菌株，可在加有抗生素的平板上分离。 分离蛋白酶产生菌，可在培养基中加入牛奶或酪素，蛋白酶产生菌在平板上生长会形成透明的蛋白质水解圈。 ;2、富集培养;;六、微生物的保藏技术： 目的：①存活，不丢失，不污染 ②防止优良性状丧失 ③随时为生产、科研提供优良菌种原理：选用优良的纯种，（最好是休眠体，如分生孢子、芽胞等），创造降低微生物代谢活动强度，生长繁殖受抑制，难以发生突变的环境条件。（其环境要素是干燥、低温、缺氧、缺营养 以及添加保护剂等）; 菌 连续在培养基上（内）移种 种 生活态 传代培养保藏法 连续在活宿主上（内）移种 保 固体斜面 藏 湿法 半固体琼脂柱 方 休眠态 液体介质（蒸馏水、糖液、其它溶液） 法 干法 藏在玻璃管内 吸附在合适的载体上;1、传代培养保藏方法： （琼脂斜面、半固体、液体） ①低温保藏法方法：菌种管置4℃冰箱保藏，定时传代 原理：低温下，微生物代谢强度明显下降 。②石蜡油低温保藏法：橡皮塞取代棉塞、加石蜡油。2、冷冻保藏——低于－70℃; 3、干燥保藏法 ④真空冷冻干燥法 加有保护剂的菌悬液在冻结状态下予以真空干燥。 适用于各种微生物，便于大量保藏，菌种存活时间长，是目前最好的保藏方法。 ⑤干燥保藏法 将菌种置于土壤、细纱、滤纸、硅胶等干燥材料上保藏。如砂土管法，适用于放线菌、芽孢菌和某些真菌保藏，保藏时间几至几十年。 ;几种常用菌种保藏方法的比较;菌种保藏机构的任务：广泛收集科研和生产菌种、菌株，并加以妥善保管，使之达到不死、不衰、不乱以及便于研究、交换和使用的目的。 菌种保藏机构： 中国微生物菌种保藏委员会(CCCCM) 美国的典型菌种保藏中心(ATCC) 英国国家典型菌种保藏所（NCTC） 法国里昂巴斯德研究所（IPL） ;一显微镜的种类及原理;;;;;;荧光显微镜 荧光显微镜和普通显微镜有以下的区别： 1. 照明方式通常为落射式，即光源通过物镜投射于样品上（如下图）； 2.光源为紫外光，波长较短，分辨力高于普通显微镜； 3. 有两个特殊的滤光片，光源前的用以滤除可见光，目镜和物镜之间的用于滤除紫外线，用以保护人目。;;荧光显微镜照片（微管呈绿色、微丝红色、核蓝色）， ;1933年Ruska发明了以电子束为光源的透射电子显微镜（transmission electron microscope，TEM），电子束的波长要比可见光和紫外光短得多，并且电子束的波长与发射电子束的电压平方根成反比，也就是说电压越高波长越短。目前TEM的分辨力可达0.2nm。 用电子束作光源，用电磁场作透镜,由电子照明系统、电磁透镜成像系统、真空系统、记录系统、电源系统等5部分构成。 ;透射电子显微镜工作示意图（左）和照片（右） ;扫描电子显微镜 ;人类血细胞SEM照片 ;二、显