第三章 高效液相色谱法幻灯片.ppt

第三章 高效液相色谱法;第一节 高效液相色谱法的特点 ;一、经典液相柱色谱法与高效液相色谱法的比较;二、气相色谱法与高效液相色谱法的比较 ;分析对象的差异;流动相差别;流动相差别（续）;操作条件差别;三、高效液相色谱法的特点;四、 影响色谱峰扩展及色谱分离的因素;（一）塔板理论 ;（二）速率理论 ;HPLC;1、涡流扩散项He ;2、分子扩散项Hd ;3、传质阻力项;(2)流动相传质阻力项： ①流动的流动相的传质阻力Hmm ;②滞留的流动相的传质阻力Hsm ;Van Deemter方程 ;分子扩散和传质阻力对板高的贡献;固定相粒度大小对板高的影响 ;;（三）影响谱带展宽的其他因素;第二节 高效液相色谱仪;;;一、贮液和脱气装置 ; 2、流动相----过滤、脱气;流动相脱气的目的 使色谱泵的输液准确 输液均匀准确，并且脉动减小 保留时间及色谱峰面积的重现性提高 提高检测的性能 防止气泡引起的尖峰 基线稳定，信噪比增加 溶剂的紫外吸收本底降低 保护色谱柱 减少死体积 防止填料的氧化 ;常用的脱气方法有： ①吹氦脱气法： 原理：利用氦气在液体中的溶解度比空气低。 特点：效果好，适合所有溶剂，但成本高，使用较少 ②加热回留法：脱气效果也比较好 ③抽真空脱气法： 特点：可以一次完成过滤和脱气任务 注意：抽真空会引起混合溶剂组分的变化，适合单一溶剂体系 ④超声波脱气法 简单，但效果不理想 ;常用的脱气方法（续）;高压输液泵性能： ①泵体材料耐化学腐蚀 ②能在高压下连续工作 ③ 输液流量范围宽 ④输出流量稳定、重复性高：流量控制的精密度应小于1%（最好为0.5% ），重复性 最好为0.5% ;1、恒流泵 输出恒定体积流量的流动相 注射型 恒流泵 往复型 双柱塞往复式并联泵 双柱塞往复式串联泵 ;往复型泵 目前使用的是双柱塞往复式并联泵和双柱塞往复式串联泵 ;;往复型泵;往复型泵;双柱塞往复式串联泵示意图;2、恒压泵（气动放大泵）—输出恒定压力的泵 优点： ?能以比较简单的方式建立高压并输出无脉动的恒压流动相液流 ?适合和折光示差检测??配合使用 ?可以利用改变气源压力的方法来调节载液流速;缺点： ? 不能输出恒定流量的流动相 ? 色谱峰的重复保留时间差 ? 不能获得可靠的定性结果 ? 液缸体积大（约70ml)，更换载液时操作不便 目前恒压泵主要用于色谱柱的制备，配合装柱用的匀浆装柱机，可以快速建立所需的高压输出 ;单液缸气动放大泵示意图;3、输液系统的辅助设备 主要有管道过滤器、脉动阻尼器、由压力传感器组成的压力测量、显示装置，以及流动相流量的测量装置 4、梯度洗脱装置 梯度洗脱技术可以提高柱效、缩短分析时间，改善检测器的灵敏度，它类似于GC种使用的程序升温技术 影响梯度洗脱的主要因素有：溶剂的纯度、溶剂的互溶性、检测器的种类;;四元低压梯度系统;三、进样装置; 2、六通阀进样装置;;;一定不能使用尖针！它会严重刮坏转子垫圈;3、自动进样器 工作站按预定程序自动完成取样、进样、复位、样品管路清洗和样品盘的移动等所有步骤 ;高压进样环进样原理;高压进样环进样原理;高压进样环进样原理;高压进样环进样原理;高压进样环进样原理;功能的拓展：;四、分离系统;2、色谱柱色谱性能的评价;五、检测系统;（一）概述 ;第七：响应值随样品组分量的增加而线性增加，线性范围宽 第八：不破坏样品组分 第九：能对被检测的峰提供定性和定量信息 第十：响应时间快 ;检测器的种类;2、衡量检测器的指标;（二）紫外检测器;比耳定律;流动池示意图; 定波长检测器 紫外检测器种类 可变波长检测器 二极管阵列检测器 ;第一种类型：固定波长紫外检测器;第二种类型：可变波长紫外检测器;新发展 ﹠可以 高灵敏度4 波长同时检测 ﹠根据4波长测定得到的吸收值之比判断峰的纯度 ﹠具有DAD检测器的相似功能 ;第三种类型：光电二极管阵列检测器（DAD）;光电二极管阵列检测器;DAD检测器的主要特点：;;例：山梨酸和苯甲酸部分 分离的色谱峰 a.山梨酸 b.苯甲酸 c.混合物;紫外普通检测器和光电二极管阵列检测器的比较;（三）荧光检测器（FLD） ;主要特点： ①灵敏度高（高于紫外吸收检测器两个数量级 ） ②选择性好 产生荧光的必要条件： 第一：物质分子