生物工業下游技術 第七章 反胶团萃取法.ppt

第七章 反胶团萃取法 ;第一节 概 述 ;反胶团萃取; 其主要原因有两个：一是被分离对象－蛋白质等在40-50℃便不稳定，开始变性，而且绝大多数蛋白质都不溶于有机溶剂，若使蛋白质与有机溶剂接触，也会引起蛋白质的变性；二是萃取剂问题，蛋白质分子表面带有许多电荷，普通的离子缔合型萃取剂很难奏效。; 反胶团溶液的概念：反胶团溶液是透明的、热力学稳定的系统。反胶团是两性表面活性剂分散于非极性有机相中亲水性基团自发形成的内含微小水滴的、空间尺度仅为纳米级的聚集体。所以表面活性剂是反胶束溶液形成的关键。 ;反胶团萃取具有成本低、溶剂可反复使用、萃取率和反萃取率都很高等突出的优点； 反胶团萃取还有可能解决外源蛋白的降解，即蛋白质(胞内酶)在非细胞环境中迅速失活的问题； 由于构成反胶团的表面活性剂往往具有溶解细胞的能力，因此可用于直接从整细胞中提取蛋白质和酶。 可见，反胶团萃取技术为蛋白质的分离提取开辟了一条具有工业开发前景的新途径。;第二节 反胶团的形成 ;一、反胶团的构造 ;将表面活性剂溶于水中，当其浓度超过临界胶团浓度(CMC)时，表面活性剂就会在水溶液中聚集在一起而形成聚集体，在通常情况下，这种聚集体是水溶液中的胶团，称为正常胶团(normal micelle)。 在胶团中，表面活性剂的排列方向是极性基团在外，与水接触，非极性基团在内，形成一个非极性的核心、在此核心可以溶解非极性物质。;若将表面活性剂溶于非极性的有机溶剂中，并使其浓度超过临界胶团浓度(CMC)，便会在有机溶剂内形成聚集体，这种聚集体称为反胶团，其结构示意见图b。在反胶团中，表面活性剂的非极性基团在外与非极性的有机溶剂接触，而极性基团则排列在内形成一个极性核(po1ar core)。;此极性核具有溶解极性物质的能力，极性核溶解水后，就形成了“水池”(water pool)。当含有此种反胶团的有机溶剂与蛋白质的水溶液接触后，蛋白质及其他亲水物质能够通过螯合作用进入此“水池”。 由于周围水层和极性基团的保护，保持了蛋白质的天然构型，不会造成失活。蛋白质的溶解过程和溶解后的情况示意于图中。 ;b;增溶、乳化、润 湿、杀菌、去污、起泡和消泡等;图1 荷叶上的水珠的表面张力作用现象;OOOOOOOOWWW（肥皂R——COO-）;（三）表面活性剂的分类;1．阴离子表面活性剂;2．阳离子表面活性剂;脂肪酸甘油酯 脂肪酸山梨坦（司盘、Span ） 聚山梨酯（吐温、Tween) 聚氧乙烯脂肪酸酯（卖泽、Myrij） 聚氧乙烯脂肪醇醚（苄泽、Brij） 聚氧乙烯-聚氧丙烯共聚物（泊洛沙姆、Poloxamer） 商品 名为普流罗尼克（Pluronic）;表面活性剂; 在反胶束萃取蛋白质的研究中，用得最多的是阴离子表面活性剂AOT(Aerosol OT)，其化学名为丁二酸－2－乙基己基酯磺酸钠，结构式见图; 这种表面活性剂容易获得，其特点是具有双链，极性基团较小、形成反胶束时不需加助表面活性剂，并且所形成的反胶束较大，半径为170nm，有利于大分子蛋白质进入。;(1)CTAB(cetyl-methyl-ammonium bromide)溴化十六烷基三甲胺/十六烷基三甲基胺溴;(2)DDAB (didodecyldimethyl ammonium bromide)溴化十二烷基二甲铵;(3) TOMAC (triomethyl-ammonium chloride)氯化三辛基甲铵;三、反胶团的物理化学特征及制备 ;临界胶团浓度(Critical Micelle Concentration CMC);反胶团的含水率W;2.反胶团的制备;第二节 生理活性物质的分离浓缩 ;b;b;反胶团的溶解作用;四种反胶团溶解蛋白质模型;表面性质不同的蛋白质可能以不同的形式溶解于反胶团相，但对于亲水性蛋白质，目前普遍接受的是水壳模型。;b;反胶团有哪些有用的特征可用于生物物质的分离？ 将反胶团萃取技术与其他蛋白质分离技术相比较，指出它们各自的适用场合？ 影响反胶束萃取蛋白质的主要因素？ ;从毛发中提取胱氨酸 ;临床上用于治疗膀胱炎、各种秃发症、肝炎、神经痛、中毒性病症、放射损伤以及各种原因引起的巨细胞减少症，并是治疗一些药物中毒等的特效药。在食品工业、生化及营养学研究领域也有广泛的应用。 胱氨酸存在于人发、猪毛、羊毛、马毛、羽毛及动物角等的蛋白质中，其中人发含量最高，达17.6％。胱氨酸是氨基酸中最难溶于水的一种，因此可利用这种特性，通过酸性水解，从废杂猪毛、人发、鸡毛、羊毛等角蛋白中，分离提取胱氨酸。 ;常规提取工艺 ;操作步骤;按废杂毛的量，先量取2倍30％工业盐酸，加入到玻璃钢或搪瓷水解罐中，通蒸气加热到70～80℃，立即投入已清洗晒干的废杂毛适量，继续加热，间隙搅拌，