2016-2017学年浙科版选修1分离以尿素为氮源的微生物学案.docVIP

第2课时　分离以尿素为氮源的微生物 【学考报告】 知识内容考试属性考情解读分离以尿素为氮源的微生物加试1.进行微生物分离。使用含有尿素的培养基，采用涂布分离法，分离有脲酶的细菌。 2.使用酚红指示剂检测以尿素为氮源的细菌的存在。 3.说明分离以尿素为氮源的细菌的实验原理。 4.举例说明本实验分离出来的细菌不一定都是以尿素为氮源的细菌。 一、以尿素为氮源的微生物 1．尿素 又称脲，是蛋白质降解的产物。在人和其他哺乳动物如家畜的尿中都含有尿素，大量尿素的存在对环境造成污染。 2．以尿素为氮源的微生物 这些细菌可以尿素为氮源，是因为其含有脲酶，通过降解尿素作为其生长的氮源。其利用尿素的反应式为： eq \x(?NH2?2C＝O＋H2O\o(――→,\s\up7(脲酶))2NH3＋CO2) 【典例剖析】 下列有关叙述，不正确的是(　　) A．脲是一种有机化合物，含有氮元素 B．地表土壤中含有一定量的脲 C．以尿素为氮源的细菌含有脲酶 D．在尿素固体培养基上培养含有脲酶的微生物会导致培养基呈酸性 解析　根据反应式：(NH2)2C＝O＋H2Oeq \o(――→,\s\up7(脲酶))2NH3＋CO2，在尿素固体培养基上培养含有脲酶的微生物会产生NH3，从而导致培养基呈碱性。 答案　D (1)土壤中含有一定量以尿素为氮源的细菌，这些细菌可产生降解尿素的脲酶。 (2)脲在脲酶作用下会产生碱性物质NH3，从而造成培养基或土壤呈碱性。 二、分离以尿素为氮源的微生物 1．实验原理 (1)以尿素为氮源的微生物含有脲酶，可以通过降解尿素作为其生长的氮源。 (2)尿素固体培养基的唯一氮源为尿素，只有能合成脲酶的微生物才能分解尿素，以尿素为氮源生长繁殖，缺乏脲酶的微生物则由于不能分解尿素而不能生长繁殖，所以，用该培养基能够筛选分离出以尿素为氮源的微生物。 (3)脲酶可使尿素分解产生氨，从而可使加入酚红指示剂的尿素固体培养基变红。 2．实验步骤 (1)倒平板 在60 ℃左右时，将两只三角瓶中已灭菌的LB固体培养基和尿素固体培养基，在酒精灯旁分别倒入两个培养皿中，在水平的超净台上摇匀，平放至凝固。 (2)制备细菌悬液 在无菌条件下，将1 g土样加到有99 mL无菌水的三角瓶中，振荡10 min，即成10－2土壤稀释液。依此法制备10－3、10－4和10－5土壤稀释液。取样时，尽量只取悬液。摇匀，放在试管架上。 (3)用涂布分离法分离细菌 取10－4和10－5的土壤稀释液各0.1 mL，分别加到有LB培养基和尿素培养基的培养皿中，再将保存在70%酒精中的玻璃刮刀(或涂布器)放在酒精灯火焰上，待刮刀(或涂布器)上火焰熄灭，在酒精灯火焰旁打开培养皿，将菌液涂布到整个平面上。 小贴士　涂布分离操作图示 (4)培养 将培养皿倒置，在37 ℃恒温箱中培养24～48 h。 (5)观察 3．实验结果 培养基细菌悬浮液稀释度10－410－5LB固体培养基尿素固体培养基(1)与稀释度为10－5相比，培养基中的平均菌落数在10－4处理中多。 (2)在相同稀释度的情况下，尿素培养基中的平均菌落数少于LB培养基中的平均菌落数，其原因是大多数微生物不能利用尿素为氮源。 (3)在尿素培养基上的菌落周围会出现红色的环带。 【典例剖析】 现从土壤中分离以尿素为氮源的细菌，实验过程如下图所示： eq \x(土样)→eq \x(土壤浸出液)→eq \x(稀释)→eq \x(接种)→eq \x(培养、观察) 请回答： (1)欲从土壤中分离出能分解尿素的细菌，将土壤用________进行一系列的梯度稀释，同一浓度的土壤稀释液应至少涂布________个平板，通常以每个培养皿中有________个以内的单菌落的那一组稀释倍数为最合适。 (2)接种后的培养皿______于37 ℃的恒温箱中培养。若培养基中存在含脲酶的细菌，其菌落周围会出现______，这是由于尿素被分解产生氨气，与该培养基中的________________________产生的颜色变化，从而证明这一菌株能以尿素为氮源。 (3)分离能利用尿素的细菌时所用的培养基成分上最主要的特点是_____________________________________________________________________。 (4)下列操作需要在酒精灯火焰旁进行的是(多选)(　　) A．称取葡萄糖、琼脂糖等培养基成分 B．倒平板 C．涂布平板 D．微生物的培养 (5)与LB全营养培养基上的菌落数相比，尿素培养基上只有少数菌落的原因是________________________________________________________________