当归苯丙氨酸解氨酶基因片段克隆和组织特异性表达分析.pdfVIP

?????一 ????? 草? 业? 学? 报? 第 ??卷 第 ?期? ?????年 ?月? ?????????????????????????? ???．??，??．?? 当归 苯 丙 氨 酸解 氨 酶 基 因片 段 克 隆 和? 组 织特 异性 表 达 分 析? 雒军? ，王 引权? ，温随超?，李静。，张金林? ，夏琦?。? ??．甘肃 中 医学 院药 学 院 ，甘 肃 兰 州 ??????；?．甘 肃 省 高校 中 ?藏 ?药 化 学 与 质 量研 究 省级 重点 实 验 室? 甘 肃 兰 州 ??????；?．兰 州 大学 草地 农 业 科 技 学 院 ，甘 肃 兰 州 ????????? 摘 要 ：苯 丙 氨 酸 解 氨 酶 ?????在 高 等 植 物 苯 丙 烷 类 代 谢 中具 有 重 要 作 用 ，与 植 物 体 内很 多 重 要 的 次 生 代 谢 产 物 的? 合 成 密 切 相 关 。当 归 主 要 药 效 成 分 阿 魏 酸 是 苯 丙 烷 类 代 谢 途 径 中 的 产 物 之 一 。 为 了探 究 阿 魏 酸 生 物 合 成 和 积 累? 的 机 理 ，本 研 究 克 隆 了 当 归苯 丙 氨 酸解 氨 酶 基 因 ?????部 分 序 列 ，运 用 荧 光 定 量 ???方 法 分 析 该 基 因在 当 归 不 同? 组 织 部 位 的 表 达 差 异 。根 据 已经 克 隆 的 植 物 ???保 守 序 列 设 计 一 对 扩 增 引 物 ，以 当 归 叶 片 总 ??? 为 模 板 ，采 用? 反 转 录 ??????? ????方 法 扩增 出 ???片 段 并 连 接 到 ???????????载 体 上 ，转 化 大 肠 杆 菌 ????，阳性 克 隆 经? ???检 测 后 测 序 ，得 到 一 段 ??????的 序 列 ?登 录 号 ：?????????，内 含 终 止 密 码 子 ???，编 码 ???个 氨 基 酸 ，与? ???????中注 册 的伞 形 科 植 物 珊 瑚 菜 等 ?个 物 种 的 ???核 苷 酸 序 列 同 源 性 和 氨 基 酸 序 列 同 源 性 都 住 ??? 以 上 ；? 运 用 ??????????荧 光 定 量 ??? 方 法 ，以 当 归 肌 动 蛋 白基 因 ?????为 内参 基 因 ，检 测 ??? 在 当 归 不 同 组 织 中 的 表? 达 量 ，结 果 显 示 ???在 叶 片 中 表 达 量 最 高 ，其 次 是 茎 和 根 ，叶片 和茎 中表 达量 分 别是 根 中 表 达 量 的 ?．?和 ?．?倍 。? 关 键 词 ：当 归 ；苯 丙 氨 酸 解 氨 酶 基 因 ；基 因 克 隆 ；荧 光定 量 ???；基 因 表 达? 中 图分 类 号 ：????．????；????．?? 文 献 标 识 码 ：?? 文章 编 号 ：????—????????????—????—??? ???：???．?????／????????????? 当归 ???????????????????为伞形 科 当归属 草本 植物 ，以干燥 根 人 药 ，具有 补 血 活血 ，调 经 止 痛 ，润 肠 通便 等 功? 效 ，为临 床常 用药??。甘 肃是 当归 主产 区 ，年 栽 培面积 和 总产量 都 占全 国 ??? 以上 ，当归 适宜 栽培 在 ????～????? ? 海 拔 的高寒 阴湿地 带 ???。 目前对 当归 栽培 模式 、当归生 理特