桃褐腐病菌角质酶基因的克隆与原核表达.pdfVIP

第 ??卷 第 ?期? 北京化工大学学报 ?自然科学版 ?? ???．??．??．?? ????年? ????????????????????????????????????????????????????????????????????? ????? 桃 褐 腐病 菌 角 质 酶 基 因的克 隆 与原 核 表 达? 麻? 莹? 责棒旦 ·加 帕 尔? 葛喜珍? 田平 芳? ??．北 京 化 工 大 学 生 命 科 学 与 技 术 学 院 ，北 京? ??????；?．北 京 联 合 大 学 生 物 化 学 工 程 学 院 ，北 京? ???????? 摘? 要 ：采用 ???法克隆了桃褐腐病菌 的角质 酶基因 ????，构建 了诱导型表达载体 ????????????，转化大肠 杆菌 ?．? ??????????，获得重组菌 ??????—????／????。经异丙基?一?一硫代吡 喃半乳糖苷 ??????诱导 ，该 重组菌角 质酶的表? 达 量 约 为 对 照菌 的 ?．??倍 ，酶 活约 为对 照 菌 的 ?．?倍 ，粗 酶 液 的 酶 活 可 达 ??．????／??。? 关 键 词 ：桃 褐 腐 病 菌 ；角 质 酶 ；原 核 表 达? 中 图 分 类 号 ：????? 验 室保 存 。? 引? 言? ?．?．? 主 要 试 剂? 角 质酶 属于 ??／?水解 酶家 族 ，能够 催 化 水 解各? ??????????、????????、限 制 性 内切 酶 、??连 接? 种 长短 链酯 类 。 由于条 件温 和 、高效 ，近 年来 角质 酶? 酶 、??????????、?????????????、卡那 霉 素 、异 丙基??? 在 纺织 、食 品等 行 业 得 以广 泛 应 用 ¨?。 目前 使 用 基? ??硫代 吡 喃半乳 糖 苷 ??????，??????公 司。分 子操? 因工 程 菌 生 产 的 角 质 酶 主 要 来 源 于 腐 皮 镰 胞 菌? 作 试剂 盒 ，苯 甲基 磺 酰 氟 ??????蛋 白酶 抑 制 剂 ，博? ?????????????????? 、尖 孢 镰 刀 菌 ????????????????—? 迈 德公 司 。? ?????? 与 嗜 热 放 线 菌 ??????????????????? 等 ，? ?．?．? 培 养基及 试 剂? 而对 于 桃褐 腐病 菌 ??????????????????????角质 酶 基 因? ?．???／?酵母 浸 粉 ，???／?胰蛋 白胨 ，???／??????，? 的报 道 较少 。桃 褐腐 病菌 可 以用 自身 表达 的角 质 酶? ?．???／?琼脂 ?固态 培 养 基 ?，加 入 去 离 子水 溶 解 配? 来分 解 果实 表皮 中的 角质 类 物 质? ，从 而侵 染 桃 果? 置 成 ??培养 基 ，灭 菌 后使 用 。? 实 ，造成 严 重腐烂 。? ???／?胰 蛋 白 胨 ，?．???／?酵 母 浸 粉 ，?．????／?? 角 质 酶 的表 达 宿 主 一般 选 择 酵 母 ，基 于 特 异 载? ????，???????体 系加入 ??％去 离子 水 完全 溶 解 ，加? 体 以实 现 分 泌 表 达? 。相 比 于 酵母