甜菜多重SSR-PCR体系的建立和优化.pdfVIP

中圊虐亏通搪 2014，30(9)：160—164 Chinese Agricultural Science Bulletin 甜菜多重SSR-PCR体系的建立和优化 吴则东 ，王茂芊 ，马龙彪 ，王华忠 ( 黑龙江省普通高校甜菜遗传育种重点实验室／黑龙江大学，哈尔滨 150080； 中国农业科学院甜菜研究所／黑龙江大学农作物研究院，哈尔滨 150080； 中国农业科学院北方糖料作物资源与利用重点开放实验室，哈尔滨 150080) 摘 要：为了建立甜菜多重SSR—PCR体系，通过利用ll对甜菜SSR核心引物，根据SSR扩增产物片段大 小的不同，构建甜菜2～5重SSR PCR反应体系。结果表明，在单一SSR-PCR的基础上，甜菜2-3重SSR— PCR的体 系为：每增加一重SSR，仅仅增加相应引物的量以及减少去 离子水的量。甜菜4-5重SSR— PCR，要在单一PCR的基础上增加0．5倍DNTPs的含量以及相应引物的量，同时根据个别引物扩增效率 的不同，相应减少或者增加0．5倍个别引物的量，并成功的构建了16个4重PCR和9个5重PCR。多重 PCR反应能够产生与单一PCR相同的多态性，但是却比单一PCR提高了2~5倍的效率，甜菜多重PCR 体 系的建立将大大加速甜菜品种纯度和真实性鉴定的速度，也将更快的促进甜菜分子生物学其他领域 的发展 。 关键词：甜菜；SSR；多重PCR；优化 中图分类号：Q943．2 文献标志码：A 论文编号：2013．1937 Construction and Optimization of M ultiplex PCR of Beet with SSR M arkers wu Zedong l2，3，Wang Maoqian‘ ，Ma Longbiao‘2f3，Wang Huazhong ．2，3， ( Key Laboratory ofSugar Beet Genetic BreedinglHeilongfiang University，Harbin 150080； 2Sugar Beet Research Institute Chinese Academy ofAgricultural Sciences~Crop Academy ofHeilongjiang University，Harbin 150080； Key Laboratory ofⅣ0 Sugar Crop Resource and Utilization,Chinese Academy ofAgricultural Sciences，Harbin 150080) Abstract：In order to build the multiple SSR-PCR system for sugar beet．the 1 1 pairs of sugar beet SSR core primer were introduced to build 2 fold to 5 fold SSR—PCR reaction system。based on the different fragment size of SSR amplification products．The results showed as follows：on the basis of single SSR—PCR，the 2 fold to 3 f0ld SSR—PCR system for sugar beet showed：each one fold increase in SSR。there was only quantity increase in corresponding primer and quantity reduced in deionized water．As to the 2 fold to 3 fold SSR—PCR system for sugar beet，Oil the basis of single PCR，O．5 fold increased in DNTPs content quantity and coresponding primer quantity，meanwhile corespondingly reduce or increase 0．5 fold quantity for individual primer according to the different amplification emciencv of individual primer．then we could successfully build 16 4一fold PCR and 9 5-fold PCR．The polymorphism pro