DNA的损伤与修复教程.ppt

第二章 DNA损伤与修复 ; 第二节 DNA 损伤 ;一、DNA损伤因素;二、多种化学或物理因素可诱发突变;物理因素： 紫外线(ultra violet, UV)、各种辐射;化 学 因 素 ：;三、突变在生物界普遍存在;3、从长远的生物史看，进化过程是突变的不 断发生所造成的。 4、大量的突变都是属于这种类型，只是目前还未能认识其发生的真正原因，因而名为自发突变或自然突变(spontaneous mutation)。;（二）只有基因型改变的突变形成DNA的多态性;（三）致死性的突变可导致个体、细胞的死亡 （四）突变是某些疾病的发病基础;四、引起突变的分子改变类型有多种;DNA分子上的碱基错配称点突变(point mutation)。 自发突变和不少化学诱变都能引起DNA上某一碱基的置换。 点突变发生在基因的编码区，可导致氨基酸改变。 ;镰形红细胞贫血病人Hb (HbS) β亚基;（二）缺失、插入和框移突变造成蛋白质氨基酸排列顺序发生改变;谷 酪 蛋 丝;（三）重组或重排常可引起遗传、肿瘤等疾病;DNA损伤（突变）可能造成两种结果：其一是导致复制或转录障碍（如胸腺嘧啶二聚体，DNA骨架中产生切口或断裂）；其二是导致复制后基因突变（如胞嘧啶自发脱氨基转变为尿嘧啶），使DNA 序列发生永久性改变。所以，必须通过进化使细胞拥有灵敏的机制，以识别和修复这些损伤，否则细胞无法维持正常代谢。; 第三节 DNA 损伤修复; DNA损伤修复(repair) ： 是对已发生分子改变的补偿措施，使其尽可能回复为原有的天然状态。 修复的意义： 保证DNA携带的遗传信息能完全地忠实转给子代、维持生物特征的稳定性和完整性。 ;一、DNA损伤的修复有多种类型;1、嘧啶二聚体的直接修复（light repair） 这是一种广泛存在的修复作用，能够修复任何嘧啶二聚体的损伤。 修复过程由光修复酶(photolyase)催化完成。;（一）直接修复系统利用酶简单地逆转DNA损伤;修复过程： ⑴修复酶(photolyase)识别嘧啶二聚体并与之结合形成复合物； ⑵在300～600nm可见光照射下，酶获得能量，将嘧啶二聚体的丁酰环打开； ⑶光修复酶从DNA上解离。 ;二、切除修复是最普遍的DNA损伤修复方式; 碱基切除修复依赖于生物体内存在的一类特异的DNA糖基化酶。 切除修复过程： （1）识别水解 （2）切除 （3）合成 （4）连接;（二）核苷酸切除修复系统识别DNA双螺旋变形;这也是一种广泛存在的修复机制，可适用于多种DNA损伤的修复。 切除修复机制的基本过程是将受损的DNA片段切除，然后再以对侧链为模板，重新合成新链进行修复。 由核苷酸切除修复系统负责进行修复。 ;切除修复系统步骤 ⑴ 核酸内切酶UvrA、UvrB和UvrC蛋白识别损伤部位 ⑵ UvrC将受损片段切除 ⑶ DNA pol Ⅰ填补缺口 ⑷ 连接酶封口;碱基丢失; 核苷酸切除修复不仅能够修复整个基因组中的损伤，而且能拯救因转录模板链损伤而暂停转录的RNA聚合酶，即参与转录偶联修复(transcription-coupled repair)。 转录偶联修复的意义在于，将修复酶集中于正在转录的DNA，使该区域的损伤尽快得以修复。 ;错配修复对DNA复制忠实性的贡献力达102-103，DNA子链中的错配几乎完全都被修正，充分反映了母链的重要性。错误的碱基配对可以通过母链中识别标记区分； 标记是GATC（回文结构）中A甲基化，E.coli中的3个蛋白质（MutS、MutH和MutL）校正。该修复系统只校正新合成的DNA，因为新合成DNA链的GATC序列中的A（腺苷酸残基）??始未被甲基化。GATC中A甲基化与否常用来区别新合成的链（未甲基化）和模板链（甲基化）。;错配修复系统作用机制： ⑴MutS蛋白识别错配的碱基；并吸引MutL 蛋白到这个位置，新生链的GATC序列未甲基化； ⑵ MutL 蛋白激活MutH蛋白，在新链的未甲基化的GATC打开缺口； ⑶外切核酸酶切除3’到5’方向错配碱基与GATC序列之间的间隔的DNA序列，聚合酶填补空缺； ⑷DNA连接酶封闭缺口，甲基化酶在新链甲基化。;新复制DNA的新旧链区别;E.Coli 错 配 修 复 系 统 作 用 机 制;重组修复(recombination repair) 这是DNA的复制过程中所采用的一种有差错的修复方式。 修复时，利用重组蛋白RecA的核酸酶活性，将另一股健康亲链与损伤缺口相互交换。 ;重组修复步