項目十一 免疫熒光技术.docVIP

项目十一　免疫荧光技术 抗核抗体检测 (Fluorescent antinuclear antibody assay) 　　 【实验原理】 　　抗dsDNA抗体是常见的抗核抗体之一，常用间接荧光抗体染色技术进行检测。选择马媾疫锥虫(Trypanosoma equiperdum ,TE)作抗原基质片是因其胞核及动基体不含组蛋白，为纯的双链DNA，抗原纯，特异性高。将待检血清滴于其上，如血清内含抗dsDNA抗体，则与TE片的dsDNA结合，在加入异硫氰酸荧光素(FITC)标记的抗人Ig抗体后，在荧光显微镜下可见到TE动基体和细胞核呈现亮绿色荧光。 　　【试剂和器材】 　　1．标本　待检血清、阳性和阴性对照血清、市售或自制TE抗原片。 2．试剂 FITC标记的抗人IgG抗体、pH7.4 0.01mol/L PBS、pH8.0缓冲甘油(取9份甘油加1份PBS混匀)。 3．器材 荧光显微镜、水浴箱或温箱、湿盒、染色缸、盖玻片、吸管、滴管、试管等。 4．动物 小白鼠。 【方法和步骤】 1．TE抗原片的制备 将TE感染小白鼠，2~4日后取小白鼠外周血按WBC计数法作TE计数，达(4.3~5.6)×106时采鼠尾血涂片，自然干燥后直接应用或冰箱保存(保存期3个月)。