第九章特殊染色(二)选编.ppt

第四节 组织内铁、钙的显示; 在某些病理情况下，细胞代谢所产生和沉着的色素，如脂褐素、黑色素、含铁血黄素、嗜铬、嗜银颗粒及组织内的微量金属离子等，则需要一些特殊染色加以证明。;一、含铁血黄素染色法 在慢性淤血的脏器组织内常有含铁血黄素沉着，一般易于同其它色素鉴别，但在不易区分的情况下可作铁反应加以证明。;含铁血黄素是由漏出于血管外的红细胞，被巨噬细胞吞噬后，分解血红蛋白产生的颗粒，HE染色为棕黄色，故称为含铁血黄素。因有时与福尔马林沉渣及黑色素等难相区别，故做含铁血黄素染色。;试剂配制：;Perls氏普鲁氏兰反应： 石蜡切片脱蜡至水。 蒸馏水洗。 2%亚铁氰化钾、20%盐酸等量混合液（用前混合）处理15-20分钟。 蒸馏水洗。 0.5%碱性品红对比染色。 95%乙醇分化。 脱水、透明、封固。 ;结 果： 含铁血黄素呈蓝色（蓝黑色）。 ;; “Heart failure” cells ;应 用： 主要用于同其它色素鉴别，若为阳性，显示陈旧性出血。 ;注意事项： Perls氏溶液临用前新鲜配制，不宜久存再用。 Perls染色过程中，应避免用生锈及其它可能造成铁质的普通水洗，而应用蒸馏水洗。;二、钙的显示;试剂配制：;染色步骤：;结 果： 钙盐呈深黑色，细胞核染成蓝色，背景呈红色;第五节 神经组织染色;神经组织主要由神经元（神经细胞）和神经胶质细胞以及神经胶质纤维组成。 神经元是由细胞体和胞突（树突和轴突）构成。细胞浆内除含有一般细胞器----线粒体、高尔基体、溶酶体以及类脂质、色素外，更主要特征是神经原纤维和尼氏小体。 神经胶质分神经胶质细胞和神经胶质纤维。神经胶质细胞广泛分布于中枢及周围神经系统，由星形胶质细胞，少突胶质细胞和小胶质细胞几种，它们分别担负着支持作用，并参与代谢活动与修复功能。;神经组织用常规HE染色，对细微结构不易显示，对神经纤维，髓鞘则无法区别。 常用的特殊显示神经组织的染色有 一、Roger氏神经原纤维法 ;操作方法： （1）石蜡切片脱蜡至水。 （2）将切片投入2%氨酒精（2毫升氨水溶于100毫升95%酒精）中12小时或更长时间，后入80%酒精快洗一下。 （3）直接由蒸馏水入40%硝酸银溶液，在56℃温箱内放置15-20分钟(此液可以重复用，染色时间与温度有关)。 （4）在蒸馏水中洗一下。 （5）入20%中性甲醛5分钟，后入5%甲醛。 （6）以吸纸吸干，后滴入重氨银溶液1分钟。 （7）吸干，后放20%甲醛5分钟，或至切片呈锈橘黄色。 （8）用蒸馏水洗 ，再放入0.2%氯化金中15分钟，或至切片呈灰色。 （9）用蒸馏水洗，后固定于5%硫代硫酸钠中1/2分钟。 （10）常规脱水、封固。;结 果 神经原纤维呈黑色。背景灰紫色;;重氨银溶液配法： 在20ml 120%硝酸银中滴入氨水，待至所产生的沉淀溶解为止，后加入10滴氨水和20ml蒸馏水。; 神经原纤维呈细线状，存在于神经细胞体及树突中，它们形成一个稠密的网状，轴突中的原纤维也互相交织在一起，且伸延至轴突全长。在HE染色中呈粉红色，难与胶原纤维相区别，故须作神经纤维染色。 应用： （1）有利于观察神经原纤维的损伤。 （2）神经系统肿瘤的诊断与鉴别诊断：如神经母细胞瘤与未分化癌的区别等。;二、尼氏小体染色;试剂配制：;染色步骤：;染色结果：;;;第六节 肌肉组织染色法;一、横纹肌染色;配制方法： Mallory氏磷钨酸苏木素 磷钨酸 2g 苏木素 0.1g 蒸馏水 100ml 先以50ml蒸馏水加热溶解苏木素，再以50ml蒸馏水溶解磷钨酸，待苏木素水溶液冷却后混合即可，于6-12个月后任其自然成熟，能得最佳的结果。如急用时，可加过氧化氢液0.2ml，以促其成熟。;操作方法： （1）固定于Zenker氏固定液的组织，如系10%甲醛固定的组织切片，可再经Zenker氏液处理，如不处理亦可染色，但其结果欠佳 （2）石蜡切片 如系Zenker氏液固定的组织，或曾经Zenker氏液处理过的切片，在染色之前需经0.5%碘酒精脱汞，水洗后再经0.5%硫代硫酸钠的脱碘。 （3）经蒸馏水洗后，将切片置于0.25%高锰酸钾溶液中5分钟。 （4）经蒸馏水洗后，再将切片置于5%草酸溶液中漂白2分钟。 （5）经蒸馏水充分洗涤后，投入Mallory氏磷钨酸苏木素染液中2-4小时，甚至延长到18小时以上。 （6）直接以95%酒精分化。 （7）纯酒精脱水。 （8）二甲苯透明，树胶封固。;【结果】 神经胶质和肌纤维均染蓝色，纤维蛋白亦染蓝色，而细胞间结缔组织纤维则染浅红色或不染色；胶原多呈粉红色，粗弹力纤维有时呈紫