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生物技术进展 2015年 第5卷 第2期 132 136 Current Biotechnology ISSN 2095—2341 猪 SsBHMT基因的原核表达及条件优化 余爱丽 ， 赵晋锋 ， 张晏萌 ， 张 正 ， 郭二虎 1．山西省农业科学院谷子研究所 ，山西 长治 046011； 2．河北农业大学生命科学学院，河北 保定 071001 ⋯ ⋯ ～ 一 ；研究论文 ； ； Articles ； 6 ⋯ ⋯ 。。 。 I 摘 要 ：甜菜碱高半胱氨酸甲基转移酶(BHMT)是一种甲基代谢酶，催化甜菜碱转 甲基到高半胱氨酸生成 甲硫氨酸。 对含有pET30a—SsBHMT重组质粒的菌株进行诱导表达分析，通过对菌株、IPTG诱导浓度、时间等诱导表达条件进行优 化，结果表明：该 目的蛋白主要以包涵体的形式出现；经过条件优化，目的蛋白表达量在上清和沉淀中均有所增加，但仍 主要以包涵体的形式存在；大肠杆菌菌株 ER2566为适合 目的蛋 白表达的菌株；在 37oC，IPTG浓度为0．4 mmol／L，诱导时 间为 10 h的条件下，目的蛋 白表达量最多。研究结果为进一步蛋白纯化与抗体制备奠定了基础。 关键词 ：原核表达；BHMT基因；条件优化 DoI：10．3969／j．issn．209S-2341．2015．02．10 Prokaryotic Expression and Optimization of Expression Conditions of BHM T Gene from Sus scrofa YU Ai．．．1i，ZHAO Jin．feng ，ZHANG Yan．meng ，ZHANG Zheng ，GUO Er—hu 1．Milet Research Institute，Shanxi Academy of Agricultural Sciences，Shanxi Changzhi 04601 1，China； 2．Colege of Life Science，Hebei Agricultural l H ，Hebei Baoding 071001，China Abstract：Betaine—homocysteine methyl transferase(BHMT)，which is a methyl—metabolizing enzyme，can catalyze methyl of betaine shifting to homocysteine，forming methionine．In this study，pET30a—SsBHMT was expressed in Escherichia coli．The strains，IPTG concentrations and induction time were optimized．The results showed that the expressed protein mainly existed in the form of inclusion bodies．After optimization，the target protein expression levels were increased both in supernatant and precipitate，but mainly in the form of inclusion bodies．In the strain of ER2566，the expression level of recombinant protein was high when induced for 10 h by 0．4 mmol／L of IPTG at 37℃ ．The results laid a foundation for further studies on the protein purification and antibodies preparation． Key words：prokaryotic expression；BHMT gene；condition optimization BHMT(betaine—homocysteine methyl transferase) 基因存在于动物和微生物体内，用于编码甜菜碱 高半胱氨酸甲基转移酶，能够催化甜菜碱的甲基 转移到高半胱氨酸上，形成二甲基甘氨酸和甲硫 氨酸 。甲硫氨酸是合成蛋白质的必需氨基酸， 是构成蛋白质的“骨架”氨基酸，甲硫氨酸含量不 足将影响其他氨基酸的利用效率，从而影响蛋白 质的合成 J。甲硫氨酸是合成腺苷甲硫氨酸 (SAM)的底物，SAM是生物体内的重要甲基供 体。甲基代谢在生物体内具有 十分重要