第二章流加发酵与高密度培养选编.pptVIP

流加发酵与高密度培养;流加发酵;分批、连续、流加操作方式的比较;流加发酵的研究进展;流加发酵所取得的三个方面的重大进展;流加发酵最优化研究的核心问题是找出最佳的底物流加方式，以维持发酵过程始终处于最佳状态 流加发酵最优化的研究内容包括： （1）状态方程的建立 （2）目标泛函的确定 （3）最优化底物流加方式的求解;流加发酵的物料衡算式可以表达为：;在采用流加发酵技术之前要考虑的两个问题 一、何时采用流加发酵方式？ 二、如何进行底物的流加？;一、何时采用流加发酵方式？ 所用底物在高浓度时对菌体生长有抑制作用 高菌体浓度培养即高密度培养系统 非生长耦联性次级代谢产物(如产物的合成需要某些营养物质或前体) 利用营养突变体的系统(过量加入营养物只能使菌体迅速生长，而目的代谢产物的产量会减少。而当营养物严重缺乏时，菌体生长受抑制，代谢产物的产量也会减小 ) 营养缺陷型菌株的培养;二、如何进行流加发酵操作？ 1. 流加发酵类型 2. 采用流加发酵应该解决的关键问题？ 3.流加发酵过程中某些重要参数的确定 4.合适的流加发酵类型的确定 5. 流加方式的应用;1. 流加发酵类型;2. 采用流加发酵应该解决的关键问题 (1) 流加什么物质？ ①补充微生物能源和碳源，如在发酵液中添加葡萄糖、 饴糖、液化淀粉。作为消泡剂的天然油脂，有时也能同时起到补充碳源的作用 ②补充菌体所需要的氮源，有机氮或氨水 ③加入某些微生物生长或合成需要的微量元素或无机盐 ④加入酶合成诱导物或前体物质;(2) 如何流加？ a.底物流加速率 b.流加开始时间及总流加时间 c.需控制的底物浓度;3. 流加发酵过程中某些重要参数的确定 最佳底物浓度的确定 (包括菌体生长阶段和产物合成阶段) b. 底物的消耗速率 c. 菌体比生长速率(?) d. 菌体对底物的产率系数(Yx/s) 及产物对底物的产率系数(Yp/s);4. 合适的流加发酵类型的确定 a.恒速流加(包括单一速率和分阶段恒速流加) b.指数速率流加 c.底物在线测定后的反馈流加 (如葡萄糖反馈流加) d. pH-stat e. DO-stat;5. 流加方式的应用 (1) 恒速流加;恒流速流加过程中的流量F的确定： 预试验中所得出的流加时刻菌体对所流加基质的消耗速率 发酵液中残留基质浓度 流加后需要控制的发酵液中的基质浓度 ;(2) 指数速率流加 在菌体生长阶段采用指数速率流加法的几点假设如下： (a) 发酵罐内为理想混合； (b) 葡萄糖为唯一限制性碳源； (c) 残留菌体对葡萄糖的产率系数(YX/s)为常数； (d) 菌体生长遵循Monod方程。 ;对底物葡萄糖进行衡算，则： ? F为体积流加速率(L/h)，S0为流加液中基质浓度(g/L)，Yx/s为菌体对底物的产率系数(g/g)，ms为细胞比维持系数(g/g/h)，X为菌体浓度(g/L)，V为培养液体积(L)，μ为菌体比生长速率(h-1)。 ;对菌体量的变化进行物料衡算，则：; 由于生长符合Monod方程μ是S的函数，要使μ恒定，S必须恒定，则有：;; 指数速率流加方式在实际过程中的注意事项： 方程中各参数要预先求知 应用时流加速率F可采用阶梯递增方式进行设定 ;微生物的高细胞密度培养;概述;后来，建立起其它的嗜温菌的高密度培养，生产各种类型产品。 甲基营养生物的高密度培养导致了聚羟基烷酸的高效生产。;;;反应器;;反应器;透析反应器;HCDC问题的解决;大肠杆菌HCDC中乙酸的形成;控制比生长速率在产生乙酸的临界??以下 一般可通过控制限制性底物浓度控制比生长速率。 比生长速率临界值： 在复合和半合成培养基中，约为为0.2h-1和0.35h-1； 在合成培养基中，为0.14h-1。 ;选择合适的培养基 例如，甘油比葡萄糖吸收进入细胞的速度要慢，可能会减少流入糖酵解途径的碳，这会极大的减少乙酸的合成。;;氧的限制;混合的限制;二氧化碳和放热的影响;温度的影响;流加控制策略;条件;无反馈控制的流加策略;条件;间接反馈控制 即时DO——当DO降低时补加营养物质。 即时pH——主要碳源耗尽引起pH上升时补加营养物质。 二氧化碳释放率（CER）——CER基本正比于碳源的消耗速度。这一方法最为经常用于控制比生长速率。 细胞浓度——营养物质流加速率由细胞浓度决定。;直接反馈控制;结论 ;展望; 谢谢!