第十三章 维生素的测定幻灯片.pptVIP

第十三章 维生素的测定 一、概述 定义 维生素既不是构成机体组织的基本原料，也不是机体的供能物质，它是一类需求量极少、人体不能合成（或合成量很少）、主要以辅酶的形式参与代谢调节，是维持人体正常生命活动所必需的天然有机化合物。目前已确认的有30余种，其中被认为至关重要的有20余种。 ; 维生素的命名 1、 多根据发现的时间顺序以英文字母排序，如维生素A、维生素B1、B2，维生素C， 维生素E等。 2、 也有根据特定生理功能，如抗干眼病因子、抗坏血酸、生育酚等， 3、? 按照其化学结构如视黄醇、硫胺素、烟酸、叶酸等。;维生素的分类;;测定食品中维生素的含量的意义;维生素的分析方法;二、脂溶性维生素的测定; 维生素A易被氧化，光和热会促进其氧化。 维生素E容易被氧化，对可见光稳定但易被紫外线破坏。 维生素K对热稳定，但容易被光、氧化剂及醇破坏。 （这样在提取时，要求尽量避光、并加入抗氧化剂） ;Global Extraction Tech for Liposoluble Vitamins ;脂溶性维生素提取的一般步骤及注意事项 步骤： 1、取样（如鱼肝） 2、加乙醇研磨或匀浆机均质化（常加入抗氧化剂（如焦性没食子酸，抗坏血酸等）） 3、加碱加热皂化（Vk除外）（使脂肪水解成脂肪酸进而形成水溶性的脂肪酸盐） 4、水洗去除脂肪酸盐 5、从水洗后的残渣中用有机溶剂提取脂溶性维生素 6、必要时进行减压回旋蒸发浓缩 7、HPLC分析 ;注意事项： 1、?在皂化和浓缩时，为防止维生素的氧化分解，加入抗氧化剂 2、?? 对于某些含脂肪量低、脂溶性维生素含量较高的样品，可以先用有机溶剂抽提，然后皂化，再提取。 3、? 对于那些对光敏感的维生素，分析操作一般需要在避光条件下进行。 ;一. 高效液相色谱法（HPLC）测定食物中维生素A、E 的含量;（一）原理 样品中维生素A 及维生素E 经皂化提取处理后，将其从不可皂化部分提取至有机溶剂中。用高效液相色谱法C18 反相柱将维生素A 和维生素E 分离，经紫外检测器，用内标法定量测定;（二）样品处理 1.皂化称取适量样品（含维生素A 约3μg，维生素E 各异构体约40μg）于三角瓶中，加30mL 无水乙醇，振摇使样品分散。加入5mL100g/L 抗坏血酸溶液和2.00mL 苯并[e]芘溶液（5μg/L，内标用），混匀，加10mL 氢氧化钾溶液（50％浓度），混匀，于沸水浴上回流30min，使皂化完全，皂化后立即放入冰水中冷却。;2.提取 将皂化后的样品移入分液漏斗中，用50mL 水分2－3 次洗皂化瓶，洗液并入分液漏斗中。用100mL 无水乙醚分2 次洗皂化瓶及残渣，乙醚液并入分液漏斗中。轻轻振摇分液漏斗2min，静置分层，弃去水层。然后每次用约100mL 水将乙醚液洗至中性，约4－5 次;3.浓缩 将乙醚提取液经无水硫酸钠（约5g）滤入150mL 旋转蒸发瓶内，用约15mL 乙醚冲洗分液漏斗及无水硫酸钠2 次，并入蒸发瓶内，于55℃水浴中减压蒸馏并回收乙醚，待瓶中乙醚剩下约2mL 时，取下蒸发瓶，用氮气吹干乙醚，随即加入2mL 乙醇，充分混合、溶解提取物。将乙醇液移入塑料离心管中，于离心机上离心5min（3000r/min），上清液供色谱分析用。;（三）液相色谱分析 色谱推荐条件： 预柱：ODS 10μm,4mm×4.5cm 分析柱：ODS 5μm,4.6mm×25cm 流动相：甲醇：水＝98：2，混匀，临用前脱气。 紫外检测器波长：300nm,量程0.02 进样量：20μL 流速：1.65～1.70mL/min;;二、比色法测定维生素A 的含量;;称取0.5～5g 样品于锥形瓶中，加入10mL50％氢氧化钾溶液及20～40mL 乙醇，于电热板上回流30min，至皂化完全。将皂化瓶内混合物移至分液漏斗中，用无水乙醚充分洗涤皂化瓶，洗液并入分液漏斗内，将水层与乙醚层分开，水层反复用乙醚抽提直至无维生素A 为止。合并醚层后，先用水洗提后，再用0.5mol/L 氢氧化钾溶液洗涤除去醚溶性酸皂，再用水洗涤醚层，直至洗涤水不呈碱性（用酚酞指示剂）为止。将醚层放出，经过无水硫酸钠脱水后，蒸馏浓缩至剩下5mL 乙醚时减压抽气至干，立即加入一定量的三氯甲烷使溶液中维生素A 含量在适宜范围内，供比色测定。;2．标准曲线制备 准确取一定量维生素 A 标准溶液于4～5 个容量瓶内，用三氯甲烷配置标准系列。再取 相同数量比色管顺次取1mL 三氯甲烷和标准系列使用液1mL，各管加入乙酸酐1 滴，制成 标准系列，于620nm 波长处，以三氯甲烷调节零点，将标准比色系列按顺序移入光路前， 迅速加入9ml 三氯化锑－三氯甲烷溶液，