环己酮单加氧酶的克隆表达及酶学性质分析.pdfVIP

第 ??卷第 ?期? 杭州 师 范大 学学 报 ?自然 科学版 ?? ? ????????．?? ????年 ?月? ????????????????????????????????????????????????????????? ???． ????? ???：??．????／?．????．????—????．????．??．???? 环 己酮 单 加 氧 酶 的克 隆 表达 及 酶 学 性 质 分 析? 翟 晓 红 ，陈 振 明? ?杭 州 师 范 大 学 生 物催 化 研 究 室 ，浙 江 杭 州 ???????? 摘? 要 ：为 研 究 鞘 氨 醇 杆 菌 中环 己酮 单 加 氧酶 的催 化 特 性 ，从 ?．?????????????????????????基 因组 ???? 克 隆 表 达 了一 个 编 码 环 己 酮 单 加 氧 酶 的基 因 ????，并 分 析 了该 基 因 产 物 的 酶 学 性 质 ．该 基 因 全 长 ??????，编 码? ???个 氨基 酸 ，理 论 分 子 量 为 ??．?????．将 携 带 此 基 因 的 重 组 质 粒 ??????—????转 入 ?．??????????????后 ，获? 得 了 ??????左 右 的表 达 产 物 ．重 组 环 己 酮 单 加 氧 酶 ??????能 氧 化 芳 香 族 硫 醚 及 其 衍 生 物 、链 式 硫 醚 、其 他 硫? 醚 和 酮 类 等 底 物 ，以 ?一氯 乙 基 苯 基 硫 醚 为 底 物 时 活 力 最 高 ???．????／???．???? 最 适 反 应 温 度 和 ?? 分 别 为? ??℃ 和 ?．??，倾 向 于利 用 ????? 作 辅 酶 ．上 述 结 果 表 明 ，重 组 ???? 是 一 个 新 型 的 环 已 酮 单 加 氧 酶 ，推 测 其? 与 硫 醚 及 酮 类 物 质 的 氧 化 降 解 有 关 ．? 关 键 词 ：环 己 酮 单 加 氧 酶 ；鞘 氨 醇 杆 菌 ；优 化 表 达 ；酶 学 性 质? 中图 分 类 号 ：????．?? 文 献 标 志 码 ：?? 文 章 编 号 ：????—?????????????????—??? ??????—????????单加 氧酶 ???????家族 属 于 黄素类 单 加 氧酶 ，通 常 用来 立 体选 择性 氧 化链 状 和环 状? 的酮 ，生成 相 应 的酯或 内酯 ，也 能催 化 硫 、氮 和 磷 的亲 电氧 化 反应 ，同 时 ?????还 能 催 化 酮 和硼 的亲 核? 氧化 反应 ???．环 己酮 单加 氧 酶不 仅可 以提 供极 有价 值 的手 性砌 块 ，而且 在手 性药 物 的合成 方 面也 具有 很 大? 的应 用潜 力．如它 可 以将极 为廉 价 的非 手性 药物 中间体 双环 ??，?，??一?一双键 一?一酮 ，加 氧 转化 为 极 为 昂贵 的? 手性 酯 ，生 成 物与 反应 物 的市场 价格 相差 近 ????倍??．它 还 可 以催 化 含 硫 原 子 的手 性 前 体 生成 光 学 活性? 的手 性药 物 如莫达 非 尼和 质子 泵抑 制剂 奥 美拉 唑等 口??．不 是所 有该 家 族 的酶都 能够 外源 表 达??，自 ??世? 纪 ??年代 第 一个 ????家 族 的环 己酮单 加 氧 酶 ?????? ?的基 因 被 克 隆???至今 ，通 过 ??????—??????? 等方 法 已经 获得 ??余 种该 类 酶．已有几 种 ?????得 到 了商 业利 用 ，