分子生物学讲座-8幻灯片1.pptVIP

4、调控基因 ? 调控基因(regulatory gene)是编码能与操纵子序列结合的调控蛋白的基因。调控方式有负调控(negative regulation)和正调控(positive regulation)。 某些特定的物质能与调控蛋白结合，使调控蛋白的空间构像发生变化，从而改变其对基因转录的影响，这些特定物质中凡能引起诱导发生的分子称为诱导剂(inducer)，能导致阻遏发生的分子称为阻遏剂或辅助阻遏剂(corepressor) 。 ;在乳糖操纵元中，调控基因1ac I位于P邻近，有其自身的启动子和终止子，转录方向和结构基因群的转录方向一致，编码产生由347个氨基酸组成的调控蛋白R，在环境没有乳糖存在的情况下，R形成分子量为152000的活性四聚体，能特异地与操纵子o紧密结合，从而阻止结构基因的转录；当环境中有足够的乳糖时，乳糖受β-半乳糖苷酶作用转变为别乳糖，别乳糖与R结合，使R的空间构像变化，四聚体解聚成单体，失去与操纵子特异性紧密结合的能力，从而解除了阻遏蛋白的作用，使其后的基因得以转录合成利用乳糖的酶类。在这过程中乳糖(实际起作用的是别乳糖)就是诱导剂。;;5、终止子 ? 终止子(terminator，T)是给予RNA聚合酶转录终止信号的DNA序列。在一个操纵元中至少在结构基因群最后一个基因的后面有一个终止子。 ;说明： 在没有乳糖存在的情况下，乳糖操纵元并非完全停止，还存在着本底组成型合成（background constitutive synthesis）。因为阻遏蛋白和操纵子的结合并不是完全牢固的。也就是说，即使没有乳糖存在，也会有少数几个结构基因群得以合成，一旦有乳糖或者类似物存在，马上可以利用。 和阻遏蛋白结合的是别乳糖，而不是乳糖。;在研究诱导作用时，并不真正用乳糖进行，因为它会被催化降解。实际上用的是一些化学合成的乳糖类似物，例如异丙基硫代半乳糖苷(isopropylthiogalactoside, IPTG)。它不受β-半乳糖苷酶的催化分解，不被细胞代谢而十分稳定，但能与R特异性结合，使R构象变化，诱导1ac操纵元的开放。是很强的诱导剂。还有巯甲基半乳糖苷（TMG）。; X-gal(5-溴-4-氯-3-吲哚-β-半乳糖苷)也是一种人工化学合成的半乳糖苷，可被β-半乳糖苷酶水解产生兰色化合物，因此可以用作β-半乳糖苷酶活性的指示剂。IPTG和X-gal被广泛应用在基因工程的工作中。 这些替代物都不是真正的酶的底物，所以称为安慰性诱导物（gratuitous inducer）。;;;四、真核生物的基因调控; 真核基因表达调控的环节更多 真核基因转录与染色质的结构变化相关 真核基因表达以正性调控为主;第五章 DNA重组与基因工程 ; 一般认为生物技术包括基因工程、细胞工程、酶工程和发酵工程几方面的内容。基因工程是生物技术的核心和关键，是主导技术；细胞技术是生物技术的基础；酶工程是生物技术的条件；发酵工程是生物技术获得最终产品的手段，四个方面相互联系的。生物技术是一个综合技术体系，其中基因工程和细胞融合技术最为突出。 蛋白质工程则是在基因工程基础上综合蛋白质化学、蛋白质晶体学、计算机学辅助设计等知识和技术发展起来的研究新领域，开创了按人类意愿设计和研制人类需要的蛋白质的新时期，被称为第二代基因工程。 ;一般来说，基因工程是指在体外将核酸分子插入质粒、病毒或其它的载体当中，形成遗传物质的重新组合，使之进入到寄主细胞内，并且在寄主细胞当中可以持续稳定地繁殖。基因工程又叫做基因重组，DNA重组技术。;第一节 工具酶 ;一、工具酶种类 1、限制性内切酶：分I、II、III 三种 2、连接酶：DNA连接酶、 RNA连接酶 3、聚合酶：DNA聚合酶、RNA聚合酶 4、激酶、磷酸酶：碱性磷酸酶、T4多核苷酸激酶 5、核酸酶：核酸外切酶、核酸内切酶（S1）、脱氧核糖核酸酶（DNaseI）、核糖核酸酶（RNase A、RNaseH、RNaseT1） 6、其他常用酶：甲基化酶、拓扑异构酶I、SSB;二、限制性核酸内切酶的概念 很多细菌和细胞中都能识别外来的核酸并将其分解，1962年发现这是因为细菌中含有特异的核酸内切酶，能识别特定的核酸序列而将核酸切断;同时又伴随有特定的核酸修饰酶。最常见的是甲基化酶,能使细胞自身核酸特定的序列上碱基甲基化,从而避免受内切酶水解,外来核酸没有这种特异的甲基化修饰,就会被细胞的核酸酶所水解.这样细胞就构成了限制--修饰体系。其功能就是保护自身的DNA,分解外来的DNA,以保护和维持自身遗传信息的稳定,这对细菌的生存和繁衍具有重要意义。这就是限制性核酸内切酶名称中“限制”二字概念的由来。;;二、限制性核酸内切酶的命名