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　　p27mt基因对人大肠癌裸鼠移植瘤模型的影响的论文 【摘要】 目的 研究p27mt基因对大肠癌裸鼠移植瘤的生长抑制和抗转移作用及其机制。方法 建立大肠癌裸鼠移植瘤模型，采用瘤体内直接注射法，测量瘤体体积，观察p27mt对移植瘤的生长抑制作用。分离瘤体，制作单细胞悬液，流式细胞术检测细胞周期，测定细胞凋亡。免疫组化检测瘤体组织中mmp9的表达。结果 adp27mt组、adlacz组和对照组移植瘤平均体积分别为（1.94±0.67）cm3、（2.75±0.83）cm3和（3.01±0.76）cm3（plt;0.05）；增殖率分别为（37.34±1.45）％、（53.16±3.27）％和（54.48±2.43）％（plt;0.05）；凋亡率分别为（19.79±3.32）％，（6.38±4.91）％和（7.25±5.20）％（plt;0.01）；mmp9的表达率为20％、75%和66.7％（plt;0.01）。结论 人突变p27mt基因通过阻滞移植瘤的增殖, 促进移植瘤细胞的凋亡来抑制移植瘤的生长，通过降低移植瘤mmp9的表达抑制移植瘤的转移。 【关键词】 大肠癌 p27mt基因 裸鼠 mmp9 随着人们生活水平的提高，饮食结构的改变，结肠癌发病率在逐渐上升[1]。结肠癌的治疗包括手术、放疗、化疗，但效果均不理想。随着后基因时代的到来，基因的功能成为人们研究的重点，为肿瘤的基因治疗带来了曙光。.p27基因是一种抑癌基因，本研究旨在通过动物实验来探讨突变型p27基因对大肠癌的生长及转移方面的作用机制，为p27治疗大肠癌提供依据。 1 材料与方法 1.1 细胞株及腺病毒 lovo细胞购于武汉大学标准物保藏中心，用rpmi1640培养基培养，调整细胞浓度至1×108/ml,台盼蓝染色活细胞计数gt;99%。adlacz由王家宁博士等构建并惠赠[2]。adp27mt由本人构建[3]。 1.2 结肠癌裸鼠移植瘤模型的建立及分组 购买balb/c裸鼠36只（湖北省实验动物管表1 各组移植瘤细胞周期分布，pi及凋亡率*：adp27mt group parisons t group,plt;0.01理中心），鼠龄4～ 6周,体重18～ 25g。取0.2ml结肠癌lovo细胞悬液，分别在裸鼠右侧背部皮下接种，共36只。成瘤后选用肿瘤大小介于0.5～ 1.5cm之间的裸鼠27只，随机分为对照组，adlacz组和adp27mt组。采用瘤体内直接注射法,每次分别注射pbs 0.1ml, adlacz0.1ml (病毒含量1010pfu/ml)和adp27mt 0.1ml(病毒含量1010pfu/ml)。3日1次，连续28天。 1.3 移植瘤体积测定 测定移植瘤的长径（a）和短径（b），按公式v=a2b/2计算体积。 1.4 流式细胞术 待裸鼠移植瘤模型治疗28d后，处死裸鼠，分离瘤体、称重、照相。分别切取移植瘤组织15g，制成单细胞悬液，取100μl，加入dnapreptmlpr 200μl混匀，室温避光3min后加入dnaprepstain 1 000μl染色试剂混匀，15min后在coulter epics xl流式细胞仪上检测细胞周期及细胞凋亡。细胞增殖指数（pi）按以下公式计算： pi=s+g2/mg0/g1+s+g2/m×100% 1.5 免疫组化检测mmp9的表达 sp法染色鼠抗人mmp9单克隆抗体，sp试剂盒，dab显色剂购自北京中山公司，具体步骤按试剂盒说明书进行。结果判断标准：mmp9为胞质中的棕黄色颗粒。在癌巢周边基质区，计数5个视野，每个视野计数细胞总数及mmp9表达阳性的癌细胞数，根据细胞着色的范围及程度，将免疫组织化学程度分为:-未见阳性染色细胞；+着色淡或着色细胞lt;10%；++着色适中或着色细胞占10%～ 25%；+++着色深或着色细胞大于50%。-为阴性表达；+/++为弱阳性表达；+++为强阳性表达。 1.6 统计学方法 计量资料用均数±标准差（±s）表示，采用独立样本t检验，计数资料用χ2检验。 2 结果 2.1 各组移植瘤末次体积比较 adp27mt组移植瘤平均体积（1.94±0.67）cm3显著小于对照组移植瘤平均体积（3.01±0.76）cm3（plt;0.05）；对照组移植瘤平均体积（3.01±0.76）cm3与adlacz组移植瘤平均体积（2.75±0.83）cm3相比较，差异无统计学意义(pgt;0.05)，见图1。 图1 移植瘤体积的比较（cm3） fig 1 parison of volum among groups in transplanted colorectal carcinoma（cm3） 2.2 各组移植