HPLC法测定五黄膏中没食子酸的含量的论文.docVIP

　　HPLC法测定五黄膏中没食子酸的含量的论文 【摘要】 目的 建立五黄膏中没食子酸的含量测定方法。方法 采用高效液相色谱法,以甲醇-0.1%磷酸溶液为流动相,梯度洗脱;流速为1.0 ml/min;检测波长为270 nm。结果 没食子酸的线性范围为0.189 2～1.892 μg(r=0.999 9),平均回收率为99.2%,rsd=1.22%。结论 本法高效、快速、灵敏,可作为五黄膏质量控制的有效方法。 【关键词】 五黄膏;没食子酸;高效液相色谱法;含量测定 　　abstract：objective to set up a method for determining the content of gallic acid in ethods hplc separation ed by gradient eluting ethanol-0.1% phosphoric acid at the flol/min. the detection . results the linear range of gallic acid ethod is highly effective, quick and sensitive, and suitable for quality control of ents. 　　key ents;gallic acid;hplc;content determination 　　五黄膏是由五倍子、黄芩、冰片3味中药组成的复方制剂,具有清热解毒、消肿止痛、化瘀散结、除湿??敛之功效[1],临床上用于治疗麦粒肿及疖、甲沟炎。.五倍子为方中主药,没食子酸为其主要有效成分。为有效控制产品质量,笔者建立了五黄膏中没食子酸含量的高效液相色谱(hplc)测定法。 　　1 仪器与试药 　　岛津高效液相色谱仪,二元梯度泵,spd-m20a检测器, sil-20ac自动进样器,cto-20a柱温箱,lc-solution化学工作站。 　　没食子酸对照品(批号110831-200302,纯度为99.1%)由中国药品生物制品检定所提供;五黄膏(批号060832、060833、060834、060835、060836、060837)由北京双吉制药有限公司提供。甲醇为色谱纯;其他试剂均为分析纯。 　　2 方法与结果 　　2.1 色谱条件 　　shiseido capcell pak c18色谱柱(4.6 mm×250 mm,5 μm),以甲醇为流动相a,以0.1%磷酸溶液为流动相b,按表1中的规定进行梯度洗脱。检测波长为270 nm,流速1.0 ml/min,进样量10 ?l。表1 梯度洗脱表 　　2.2 空白试验 　　按处方中药味比例,配制不含五倍子的群药,按其工艺制成空白制剂(由北京双吉制药有限公司提供),再按供试品溶液的制备方法制备并测定,色谱图见图1。表明阴性样品溶液在与没食子酸对照品相同保留时间处未显色谱峰,故认为无干扰。 　　2.3 对照品溶液的制备 　　精密称取没食子酸对照品适量,加50%甲醇制成每1 ml含60 ?g的溶液,作为对照品溶液。 　　2.4 供试品溶液的制备 　　取本品0.5 g,精密称定,置具塞锥形瓶中,精密加入50%甲醇50 ml,密塞,摇匀,称定重量,加热回流1 h,放冷,再称定重量,用50%甲醇补足减失的重量,摇匀,用微孔滤膜(0.45 ?m)滤过,取续滤液,作为供试品溶液。 　　2.5 线性关系的考察 　　精密吸取没食子酸对照品溶液(0.094 6 mg/ml)2、4、8、12、16、20 ?l,注入液相色谱仪,记录峰面积。以峰面积值(a)对进样量(c)进行回归,得标准曲线方程为：a=3.877×106+2.468×103,r=0.999 9(n=6)。没食子酸在0.189 2～1.892 ?g 　　范围内线性关系良好。 　　2.6 精密度试验 　　精密吸取同一供试品溶液(批号060832)10 ?l,注入液相色谱仪,按上述色谱条件测定。重复测定6次,没食子酸峰面积rsd=0.25%。 　　2.7 稳定性试验 　　精密吸取同一供试品溶液(批号060832)10 ?l,分别于配制后0、4、8、12、24 h测定,测得峰面积rsd=0.27%,表明供试品溶液在24 h内基本稳定。 　　2.8 重复性试验 　　取同一批样品(批号060832)6份,分别按样品测定法测定,求得rsd=0.94%,结果表明方法重复性良好。 　　2.9 加样回收率试验 　　精密称取已知含量的同一批样品(批号060832,6.317 mg/g) 0.25 g,分别精密加入没食子酸对照品溶液(0.060 72 mg/ml) 25 ml,再精密加入50%甲醇25 ml,按上述供试品溶液的制备方法制备及上述色谱条件测定,计算回