RNA干扰survivin基因对HepG2细胞凋亡及化疗影响的论文.docVIP

　　RNA干扰survivin基因对HepG2细胞凋亡及化疗影响的论文 rna干扰survivin基因对hepg2细胞凋亡及化疗影响 【关键词】 肝肿瘤;survivin;rna干扰;药物疗法 【摘要】 　　目的 探讨rna干扰survivin基因对hepg2细胞凋亡及化疗敏感性的影响。方法 构建针对hepg2细胞 survivin基因的 shrna真核表达载体pshrnasurvivin387。将hepg2细胞接种于6孔板中，分为空白对照组(不加药物)、阴性对照组(每孔加pshrnasurvivinnc为3.2 μg)、低浓度转染组（每孔加pshrnasurvivin387为0.8 μg）、中浓度转染组(每孔加pshrnasurvivin387为1.6 μg)、高浓度转染组(每孔加pshrnasurvivin387为3.2 μg),作用48 h后收集细胞，流式细胞术检测各组细胞凋亡指数；将hepg2细胞接种于96孔板中，分为3组:空白对照组（不加药物）、阴性对照组（每孔加pshrnasurvivinnc为0.2 μg）、实验组（每孔加 pshrnasurvivin387为0.2 μg），四甲基偶氮唑蓝法检测各组细胞分别与??铂(2.0 mg/l)作用24、36、48、60 h后的增殖水平。结果 各浓度转染组细胞的凋亡指数明显高于空白对照组和阴性对照组(f=228.87，q=10.45～38.21,p＜0.01)，高浓度转染组细胞凋亡指数高于低浓度转染组(q=23.99，p＜0.01)。.顺铂对实验组细胞的细胞抑制率在24、36、48、60 h时明显高于空白对照组和阴性对照组(f=235.88～910.86,q=28.04～52.28,p＜0.01)。结论pshrnasurvivin387转染能诱导肝癌细胞的凋亡，增强肝癌细胞对顺铂化疗的敏感性。 【关键词】 肝肿瘤;survivin;rna干扰;药物疗法 　　effect of rna interference targeting at survivin gene on apoptosis and chemotherapy of hepatocellular carcinoma cell line hepg2 　　sun yao, lei ent of oncology, the affiliated hospital of qingdao university medical college, qingdao 266003, china) ; 　　［abstract］ objective to investigate the effect of rna interference targeting at survivin gene on the apoptosis and chemosensitivity of hepatocellular carcinoma cell line hepg2. methods survivin gene sequence specific shrna vectors pshrnasurvivin387 ediumdose group (1.6 μg pshrnasurvivin387/ined by floetry. hepg2 cells cultured in 96tt assay g/l) after 24, 36, 48 and 60 hours. results the apoptotic index of the loedium and highdose pshrnasurvivin387 groups otherapy. 　　［key s; survivin; rna interference; drug therapy 　　survivin基因是凋亡蛋白抑制因子(iap)家族成员，其基因定位于人染色体17q25，长度15 kb,其表达蛋白约由142个氨基酸构成。survinvin在成熟分化组织中基本不表达，而在肿瘤组织中特异性高表达，具有抑制细胞凋亡、参与血管形成的功能，从而作为肿瘤基因治疗靶点受到广泛瞩目。rna干扰 (rnai)即将与目的基因同源的小分子双链rna(dsrna)导入细胞中，导致目的mrna降解，从而阻断真核细胞中相应基因产物的表达。本实验利用rnai技术阻断人肝癌hepg2细胞survinvin的表达，并观察其对细胞凋亡及化疗敏感性的影响。现将结果报告如下。 　　1 材料与方法 　　1.1 材料 　　1.1.1 主要试剂 　　lipofectamine 2000转染试剂盒购自invitrogen公司;胎牛血清购自杭州四季青生物工程材料公司；rp