siRNA阻断NFκB信号通路联合5Fu对食管鳞癌细胞周期的影响的论文.docVIP

　　siRNA阻断NFκB信号通路联合5Fu对食管鳞癌细胞周期的影响的论文 【摘要】 目的 利用rnai技术特异性的抑制nfκb亚单位p65的表达，探讨在食管鳞癌细胞中将nfκb作为基因治疗靶点的价值。方法 将荧光素标记的对照sirna转染到食管鳞癌细胞中观察转染效率，p65 sirna转染到ec9706和eca109细胞中，使用sa法检测转染前后p65与dna结合活性的变化;流式细胞仪检测p65 sirna与5fu(327μg/ml)单独或联合应用，对食管鳞癌细胞周期的影响。结果 荧光素标记的sirna转染食管鳞癌细胞的效率可达90%以上。在转染后的ec9706和eca109细胞中，p65和cyclin d1蛋白的表达水平下调; nfκb与dna的结合活性明显下降;g0/g1期的细胞开始增加，同时s期的细胞逐渐减少;当转染p65 sirna细胞联合使用5fu时，g0/g1期的细胞明显增加，同时s期的细胞明显减少。结论 p65 sirna可以特异性的阻断nfκb信号通路，下调nfκb下游基因中细胞周期蛋白cyclin d1的表达，表明活化的nfκb信号通路可以成为食管鳞癌基因治疗中一个重要的分子靶点。　　【关键词】 食管鳞癌;nfκb;rna interference;cyclin d1 　　effect of sirnamediated inhibition of nfκb bination ent of pathophysiology, basic medical college of zhengzhou university, zhengzhou 450052, china，2. laboratory for cell biology，3. department of histology and embryology 　　corresponding author：xue lexun，email：xuelx@371.abstract：objective rna interference (rnai) ployed to inhibit the expression of p65 and to evaluate the effects of nfκb signaling pathethods a fluoresceinlabeled nonspecial sirna onitor efficiency in ec9706. ec9706 and eca109 p65sirna, p65 and cyclind1 protein levels ined using sa. escc cells etry. results a fluoresceinlabeled nonspecial sirna onitor efficiency in ec9706, demonstrating nearly 90% transfection efficiency. the protein level of p65 and cyclind1 decreased after transfected ore prominence. conclusion p65sirna inhibits the constitutively active nfκb signaling pathakes nfκb a target for the development of novel therapeutic strategies. 　　key ous cell carcinoma;nfkappab;rna interference;cyclin d1 　　食管鳞癌是一种侵袭性很强的肿瘤，它的预后差，临床进展迅速，多伴有淋巴结转移，且易复发。.cOm核因子nfκb (nuclear factorkappa b) 是近年来发现的转录调控因子，最常见的形式是由 p50 和p65组成的异源二聚体，在绝大多数静止期的细胞中，nfκb 与其阻抑物iκbα蛋白相结合，以非活性形式存在于细胞质中。许多刺激物可以通过对iκbα的磷酸化而使其降解，使解离的nfκb进入到核内并暴露它的核识别位点，从而促进靶基因的转录。活化的nfκb信号通路可增强肿瘤细胞对放化疗药物的抵抗力，从而产生耐药性。有研究表明，在许多人类肿瘤中nfκb信号通路的激活在肿瘤的发生发展中起着重要的作用[13]。 　　rna干扰(rna interference，rnai)是由双链rna(doublestranded rna，dsrna)引发的转录后基因静默机制，是目前研究基因功能强有力的工具之一[4]。rnai 的功能是由21～23 个碱基长的短