siRNA抑制前列腺癌细胞PC3的MDM2表达及细胞增殖的论文.docVIP

　　siRNA抑制前列腺癌细胞PC3的MDM2表达及细胞增殖的论文 【摘要】 目的 研究sirna mdm2对人前列腺癌细胞pc3的mdm2表达和细胞增殖的作用。方法 构建pgcsilencertmmdm2 sirna，并转染入pc3细胞,分别用rtpcr和dm2对pc3细胞mdm2基因和蛋白表达的抑制作用；用mtt法检测simdm2对pc3增殖抑制的作用，用流式细胞术检测simdm2对pc3细胞凋亡的影响。结果 ptpcr和dm2能显著抑制pc3细胞mdm2基因和蛋白的表达，抑制率最高可达65%;mtt和流式细胞术结果证明simdm2能显著抑制pc3细胞增殖并诱导细胞凋亡。结论 simdm2能特异有效地抑制mdm2在pc3中的表达，并抑制pc3细胞增殖，促进其凋亡。 【关键词】 sirna; mdm2; 前列腺癌; rtpcr; 流式细胞术 sirna inhibits mdm2 expression and cell proliferation in pc3 cell line li ranent of urinary surgery，the second hospital of jilin university，changchun 130041，china；2. department of internal medicine, shenzhen shekou peodles hospital；3. department of surgery, chinajapan union hospital of jilin university, 4. department of radiotherapy, 5. department of orthopedics corresponding author: zhao yanying, emai l:yanying0609@163.abstract：objective to study the effect of sirna to mdm2 on cell proliferation and mdm2 expression in prostate the cancer cell pc3. methods pgcsilencertmmdm2 sirna dm2 gene expression ined by mtt assay. the cell apoptosis eter. results the results of rtpcr and dm2 tt and floeter shodm2 could significantly inhibit mdm2 expression, the proliferation of pc3 cells and induce apoptosis of pc3 cells. key dm2; prostate cancer; rtpcr;floetry 前列腺癌是50岁以上男性中最常见的恶性肿瘤[1]。.mdm2癌基因在许多癌症都过表达，包括前列腺癌、肉瘤、血液恶性肿瘤、乳腺癌和结肠癌[2]。sirna技术的有效和特异基因阻断特点,使其在肿瘤治疗上的应用已成为研究的热点。本文主要研究sirna mdm2对pc3人前列腺癌细胞mdm2表达、增殖和凋亡的影响，为基因治疗前列腺癌提供新的思路和实验依据。 1 材料方法 1.1 材料 胎牛血清,imdm培养基购自gibco公司;silencer sirna construction 试剂盒购自ambion公司;lipofectamim 2000转染试剂和trizol试剂购自invitrogen公司; rtpcr试剂盒购自takara公司;mtt为sigma公司产品;兔抗人mdm2多克隆抗体和碱性磷酸酶标记羊抗兔igg多克隆抗体均购自美国santa cruz公司。 1.2 sirna重组质粒构建及鉴定 根据已知genebank mdm2 mrna序列和sirna的设计原则[3],利用ambion公司的在线设计来寻找靶序列,并排除和其他编码序列或est同源的序列,sirna和靶序列，见表1。用silencer sirna construction kit体外合成针对人mdm2基因序列特异的si mdm21、si mdm22和si mdm23,严格按照试剂盒工作手册进行操作，阴性对照control sirna与任何编码序列无同源性购于ambion。将pgcsilencertmmdm2 sirna用hind ⅲ/bam hⅰ双酶切鉴定，并将0.8ml培养扩增(摇至对数晚期)的细菌加甘油0.2ml,送上海生工检测核苷酸序列。表1 sirna 序列 　　1.3 细胞