第7章发酵工程在现代生物技术中的应用.pptVIP

发酵工程在现代生物技术中的应用;生物技术：应用自然学和工程学的原理，依靠生物作用剂的作用将生物物料进行加工以提供产品和为社会服务的技术。 ;20世纪70年代以后，以DNA重组技术的建立为标志，形成了一个以基因工程为主导，发酵工程为中心，包括细胞工程和酶工程的现代生物技术体系。 ;第一节 基因工程菌发酵;基因工程菌的制备;基因工程菌的制备;二、载体的准备 目前常用的基因克隆载体： 1.质粒：严密性质粒和松弛型质粒 2.pBR322和pUC：去除原有质粒的非必须功能，引入选择标记和在适宜的位置设置限制酶单一切点。 3.噬菌体载体 有λ噬菌体和M13噬菌体;三、基因与载体的连接 外源DNA与载体DNA之间连接方式： 1.粘性末端连接 先用一种酶切割外源DNA并将拟插入的那个片段用凝胶电泳分离出来，再用同一种酶去切载体DNA，这样可以通过粘性末端连接起来。; 2.平末端连接 3.在DNA片段末端加上均聚寡核苷酸后连接：末端核苷酸转移酶能催化DNA末端的3 ′-OH上添加单核苷酸的反应，形成 寡聚核苷酸连，如果在一个DNA片段的3 ′-OH末端上添加寡聚T，那么另一DNA片段的3 ′-OH 末端上一定添加与T互补的寡聚A。;四、目的基因导入受体细胞 取决于是否用合适的受体细胞、合适的克隆载体和合适的基因转移方法;2、干热灭菌法 进行干热灭菌时，微生物细胞发生氧化，微生物体内蛋白质变性和电解质浓缩引起中毒等作用，其中氧化作用导致微生物死亡是主要依据。由于微生物对干热的耐受力比对湿热强得多，故干热灭菌所需的温度要高，时间要长，一般160～170℃，1～1.5h。 实际应用时，对一些要求保持干燥的实验器具和材料可以采用干热灭菌法。;湿热灭菌法 利用饱和蒸汽进行灭菌的方法称为湿热灭菌法。 其原理是借助于蒸汽释放的热能使微生物细胞中的蛋白质、酶和核酸分子内部的化学键，特别是氢键受到破坏，引起不可逆的变性，使微生物死亡。 由于蒸汽有很强的穿透能力，湿热灭菌对耐热芽孢杆菌来说，温度升高10 ℃时，灭菌速度常数可增加8～10倍，对营养细胞更高。 蒸汽来源方便，价格低廉，灭菌效果可靠，是目前最为常用的灭菌方法。一般的湿热灭菌条件为121 ℃，30 min。 ;湿热灭菌法;湿热灭菌法;湿热灭菌法;应用范围 培养基，水，发酵罐等其他不适合干热灭菌的物品。 高压蒸汽灭菌法的注意事项： 完全排除锅内冷空气 灭菌完毕后要缓慢减压 压力降为零后打开盖子;二、辐射灭菌法 利用高能量的电磁辐射和微粒辐射来杀死微生物 以紫外线最常用。紫外线对芽孢和营养细胞都能起作用，但细菌芽孢和霉菌孢子对紫外线的抵抗力强。紫外线的穿透力低，仅适用于表面灭菌和无菌室、培养间等空间的灭菌，且距照射物不超过1.2 m；对固体物料灭菌不彻底，也不能用于液体物料的灭菌。;三、化学药品灭菌法 某些化学药品与微生物发生反应（蛋白变性、酶失活、细胞通透性）而具有杀菌的作用。 化学药剂适于生产车间环境的灭菌，接种操作前小型器具的灭菌等，不适用于培养基。 化学药品的灭菌使用方法，根据灭菌对象的不同有浸泡、添加、擦拭、喷洒、气态熏蒸等。;⑴ 高锰酸钾 高锰酸钾溶液的灭菌作用是使蛋白质、氨基酸氧化，使微生物死亡，一般用0.1％～0.25％的溶液。 ⑵ 漂白粉 漂白粉的化学名称是次氯酸盐(次氯酸钠，NaOCl)，它是强氧化剂，也是廉价易得的灭菌剂。它的杀菌作用是次氯酸钠分解为次亚氯酸，后者不稳定，在水溶液中分解为新生态氧和氯，使细菌受强烈氧化作用而导致死亡，对杀死细菌和噬菌体均有效。;⑶ 75％酒精溶液 75％酒精溶液的杀菌作用在于使细胞脱水，引起蛋白质凝固变性。对营养细胞、病毒、霉菌孢子均有杀死作用，但对细菌的芽孢杀死作用较差。常用于皮肤和器具表面杀菌。 ⑷ 新洁尔灭 新洁尔灭是表面活性剂类洁净消毒剂。它在水溶液中以阳离子形式与菌体表面结合，引起菌体外膜损伤和蛋白变性。10 min能杀死营养细胞，但对细菌芽孢几乎没有杀灭作用。一般用于器具和生产环境的消毒，不能与合成洗涤剂合用，不能接触铝制品。;⑸ 甲醛 甲醛(HCHO)是强还原剂，它能与蛋白质的氨基结合，使蛋白质变性，对氨基和蛋白质的变性有较强活性，这是用甲醛作为灭菌剂的根据。使用时可以以2份37％甲醛溶液与1份KMnO4混合，或者将37％甲醛溶液直接加热，产生气态甲醛用于灭菌。甲醛灭菌的缺点是穿透力差。 ⑹ 过氧乙酸 过氧乙酸是强氧化剂，它是广谱、高效、速效的化学杀菌剂，对营养细胞、细菌芽孢、真菌孢子和病毒都有杀灭作用。;⑺ 戊二醛 在酸性条件下，不具有