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山东大学 期末考试知识点复习 第八章 毛细管电泳分析法 1．毛细管电泳的主要特点 以毛细管为分离通道、以高压电场为驱动力的液相分离分析技术，具有高效分离、快速分析、微量进样和灵敏度高的特点，特别适合离子、大分子与生物化合物的分离分析。 2．毛细管电泳仪基本组成与结构流程 毛细管电泳仪主要由高压电源、缓冲液和进样系统、毛细管柱、检测．器及数据处理等五部分组成。 高压电源可对毛细管施加连续可调的0～50 kV直流电压，毛细管柱是电泳分离的核心部件，通常使用内径10～100μm，长12～120 cm的弹性熔融石英毛细管，两端分别浸泡在含有缓冲溶液的储液槽中，出口端装有检测器。紫外可见光谱检测是最普遍的检测方法，激光诱导荧光检测是所有检测方法中灵敏度最高的，最低检出限可达10-21mol。 3．毛细管电泳的进样方式 电迁移(电动)进样：在很短时间内，施加电压使样品通过电迁移进入毛细管。特点：易控制进样量(控制电压和时间)，存在歧视现象，即电泳淌度大的组分进样量大。 流体力学进样：进样端加压、出口端抽真空及两端形成高度差产生虹吸三种方式。特点：进样量不受样品基质的影响，不存在歧视现象，进样重复性差。 4．毛细管电泳分离的基本原理 在毛细管电泳分离中带电粒子的运动受到两种力的共同作用：电泳力和电渗力。 电解质的电泳迁移速率 单位电场强度下的平均电泳速度，即电泳迁移率(电泳淌度μe)： E为电场强度；f为阻力系数；V为毛细管柱两端施加的电压；Rs是离子的有效半径；L为毛细管柱的长度。 在pH3的水溶液中，石英或玻璃毛细管内壁表面上的硅醇基可电离而产生SiO一，使毛细管内壁带上负电荷，因此溶液中的一部分正离子，依靠静电作用而吸附于毛细管内壁上，形成一个双电层，此处的电动势称为界面电动势，也称ζ电位。在电场的作用下，固、液两相之间发生相对运动，管中溶液整体向阴极移动，形成电渗流。 电渗流的大小与ζ电位成正比，电渗迁移率 μeo=εζ／(4πη) 式中，μeo为电渗迁移率；ε为介质的介电常数；η为介质的黏度。 电渗迁移速率为电泳流的若干倍，且受pH等条件的影响很大，在分离过程中很容易发生变化，因而必须加以控制，使其在一定范围内保持恒定。 电渗流(即溶剂流)的迁移速率为veo，则 veo=μeoE=ζE／(4πη) 毛细管中粒子的移动速度(v1)等于其电泳迁移速度(ve)与电渗流速度(veo)的矢量和： v1=ve+veo 当把样品从阳极端注入毛细管时，各种离子将按下面的速度迁移到阴极： 正离子：v+=ve+veo 中性离子：v=veo 负离子：v一=ve一veo 5．毛细管电泳的分离模式 毛细管电泳的分离模式可分为电泳分离和色谱分离两类： 电泳分离模式主要包括：毛细管区带电泳(CZE)；毛细管凝胶、电泳(CGE)；毛细管等速电泳(CITP)；毛细管等电聚焦(CIEF)。 色谱分离模式主要包括：胶束电动毛细管色谱(MEKC)；毛细管电色谱(CEC)。 6．毛细管区带电泳(CZE) CZE是毛细管电泳最基本的一种分离模式，电泳时所采用的背景电解质是缓冲液，分离是基于样品中各个组分间荷质比的差异，依靠样品中的不同离子成分在外加电场作用下电泳淌度的不同而实现分离，有时需在缓冲液中加入一定的添加剂，以提高分离选择性，改变电渗流的大小和方向或抑制毛细管壁的吸附等。 7．胶束电动毛细管色谱(MEKC) MEKC是毛细管电泳中唯一既能分离中性化合物又能分离带电组分的分离模式。在背景电解质中加入超过临界胶束浓度的表面活性剂，使之在溶液中形成胶束，在电泳中，这些胶束按其所带电荷的不同朝着与电渗流：EOF相同或相反的方向迁移，作为一种“假固定相”，使样品组分在受电场作用的同时，又能在背景电解质和此“假固定相”之间进行分配，依据其电泳淌度和分配行为的不同而进行分离。 8．毛细管电色谱(CEC) CEC主要是基于色谱分离机制而进行分离的电泳技术，它在毛细管中填充了液相色谱用固定相载体，使被分离组分在这些载体上进行保留和分配。它与液相色谱技术的区别在于前者以电渗流为驱动力，后者以压力为驱动力。 9．毛细管等电聚焦(CIEF) CIEF是依据样品组分的等电点不同而实现分离的一种电泳技术。分离时需将待分离的两性化合物与能在毛细管内形成一定pH梯度的两性电解质同时引入毛细管，并以酸性溶液作为阳极缓冲液，碱性溶液作阴极缓冲液，施加电场后，两性电解质能在一定的pH范围内迅速建立 起稳定的pH梯