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第二军医大学学报 ２０１４年１０月第３５卷（增刊） ＡｃａｄｅｍｉｃＪｏｕｒｎａｌｏｆＳｅｃｏｎｄ Ｍｉｌｉｔａｒｙ ＭｅｄｉｃａｌＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｏｃｔ．２０１４，Ｖｏｌ．３５（Ｓｕｐｐｌ） ·２７· 犃犛２８ 犫 犎２犓／犗犞犃２５７２６４复合体的原核表达、折叠、纯化与鉴定 丁　双１，顾冬梅２，许文锦２；指导教师：沈传来 １．东南大学２０１０级临床医学七年制 ２．东南大学２０１０级护理学 　　【目的】　目前ｐＭＨＣ复合体（即 ＭＨＣ分子与抗原肽的复合体）常被用来检测特异性 Ｔ 细胞的数量，还是 Ｔ 细胞功能分析、抗原表位验证以及 Ｔ 细胞靶向治疗等诸多方面的有力工具。但是其制备技术复杂，复性、折叠和 纯化等步骤受多种因素限制，产出效率较低。国内目前尚无生产厂家，一定程度上限制了我国基础与临床免疫学 ｂ 的更快发展。本实验旨在制备小鼠 Ｈ２Ｋ／ＯＶＡ２５７２６４复合体，验证其正确构象和与特异性 Ｔ 细胞 ＴＣＲ 有效结合 的功能，为在小鼠模型中进行移植排斥和肿瘤的生物治疗研究提供靶向工具。 ｂ 【方法】　利用ＩＰＴＧ 诱导编码小鼠 Ｈ２Ｋ 蛋白重链的重组质粒和 ＯＶＡβ２ｍ 融合蛋白的重组质粒在大肠杆 　　 　 菌 ＢＬ２１中表达；通过超声粉碎、洗涤、化学纯化等方法收集两种重组蛋白，经 ＳＤＳＰＡＧＥ 鉴定重组蛋白的纯度和 　　 　 　　　 　 　　　 　 分子大小；再经稀释复性法在体外折叠并超滤浓缩；利用尺寸排阻层析法在 ＦＰＬＣ 系统 中 纯 化 收 集 Ｈ２Ｋｂ／ＯＶＡ 复合体，经 ＢＣＡ 法蛋白定量后分装保存；通过包被细胞大小的 ＰＬＧＡ 微球，用 Ｈ２Ｋｂ 分子构象特异性单抗进行荧 光染色，??流式分析验证该复合体的空间构象；利用 ＯＶＡ 抗原特异性的 ＯＴ１细胞株和流式细胞术分析检测该自 制分子与 ＴＣＲ 的结合能力。 【结果】　两种重组质粒在大肠杆菌中表达后，经 ＳＤＳＰＡＧＥ 分析分子量同预计大 小 相 等；复 性、折 叠、ＦＰＬＣ 系统纯化洗脱后得到３ 个 峰，其 中 第 一 个 洗 脱 峰 经 ＳＤＳＰＡＧＥ 鉴 定 证 实 含 有 重 链 蛋 白 和 轻 链 蛋 白，为 Ｈ２Ｋｂ／ ＯＶＡ 复合体峰；流式荧光染色分析 显 示：该 复 合 体 包 被 ＰＬＧＡ 后 能 与 构 象 特 异 性 抗 体 呈 有 效 结 合，提 示 构 象 正 确；用该分子制备的 ＰＥ标记的 Ｈ２Ｋｂ／ＯＶＡ 四聚体染色 ＯＴ１转基因鼠的脾细胞，经流式检测：ＯＴ１细胞占脾细 胞群的１６．３５％。 【结论】　利用大肠杆菌成功表达了小鼠 Ｈ２Ｋｂ分子的重组重链和轻链，并经体外折叠和纯化成功制备了构象 正确、能与特异性 ＴＣＲ 结合的 Ｈ２Ｋｂ／ＯＶＡ 复合体。 　　关键词：ＭＨＣ；小鼠 Ｈ２Ｋｂ／ＯＶＡ 复合体；折叠；纯化；ＦＡＣＳ检测 犃犛２９ 磁场下制备的γ犉犲２犗３ 膜对成骨细胞分化作用的效果研究 单世豪，黄继青，陈奕含，李雪琼；指导教师：刘　璇 东南大学２０１１级生物工程 　　【目的】　骨质疏松症已成为世界公共卫生问题，针对骨质疏松症的基础及临床研究是目前国际研究的热点。 目前已有实验证明 ＰＬＡ／γＦｅ２Ｏ３ 复合