柱前衍生高效液相色谱法测定四氢噻唑-2-硫酮-4-羧酸的光学纯度.pdfVIP

第 35 卷 分析化学（FENXI HUAXUE） 研究简报 第 4 期 2007 年 4 月 Chinese JournaI of AnaIyticaI Chemistry 545 ~ 548 柱前衍生高效液相色谱法测定 四氢噻唑-2-硫酮-4-羧酸的光学纯度 余 荔 宋 航” 徐 旭 杨 丹 陈宇静 （四川大学制药与生物工程系，成都 610065） 摘 要 用苯胺对四氢噻唑-2-硫酮-4-羧酸（TTCA）进行柱前衍生，将其衍生物在手性固定相上拆分，通过二 极管阵列紫外检测器和在线旋光检测仪对其衍生物进行检测，建立了一种拆分 TTCA 消旋体、测定 TTCA 光 学纯度的新方法。以正己烷和乙醇或异丙醇为流动相，在 DNB-leucine 手性固定相上对 TTCA 衍生物进行了 拆分，并考察了流动相组成和柱温对其衍生物分离的影响，获得较优分析条件，分离因子大于 1. 2。非手性试 剂苯胺柱前衍生化法测定（!）-TTCA 的光学纯度与旋光度方法比较，结果一致，相对偏差小于 1. 34% 。 关键词 高效液相色谱，柱前衍生化，手性固定相，四氢噻唑-2-硫酮-4-羧酸，光学纯度 1 引 言 （!）-四氢噻唑-2-硫酮-4-羧酸（（!）-2-thiothiazoIidine-4-carboxyIic acid，（!）-TTCA）是一种较新的手 性拆分试剂，可用于拆分氨基酸酯、氨基醇、苯乙胺等外消旋体［1］，它还是作为检查尿样中二氧化硫含 ［ ］ ［ ，］ 量的标准试剂 2 。目前采用的反相色谱法只能检测出 TTCA 的含量 3 4 ，不能拆分 TTCA 消旋体得到单 一对映体，也不能检测出（!）-TTCA 的光学纯度。但作为手性拆分试剂，仅知道其旋光度值而不了解其 光学纯度，不仅影响高光学纯度（!）-TTCA 合成的优化研究，也直接妨碍其应用。目前有关用手性色谱 柱直接拆分 TTCA 消旋体尚未见报道。本研究前期工作曾尝试用 OD-H、WheIk-O1、DMB、DNB-leucine、 DNB-PG 等手性柱对 TTCA 消旋体进行直接拆分，没有获得成功。所以本实验采用柱前衍生化法。虽 然用手性试剂衍生样品通常能加强手性柱的对映体的分离能力，但是要求手性衍生化试剂有足够的光 学纯度（纯度 99% ），且应避免在衍生化过程中外消旋化。而用非手性试剂衍生化并通过手性固定相 分离，因无需光学纯试剂，应用范围较广，已受到关注并得到应用［5］。 本研究采用廉价易得的非手性试剂苯胺对 TTCA 进行柱前衍生化，然后在常用的手性柱上进行拆 分。通过二极管阵列紫外检测器和在线旋光检测仪对 TTCA-苯胺衍生物进行检测，确定了两个单一对 映体的保留时间。并结合旋光度测定，确定该柱前衍生化法的可靠性和准确性。非手性试剂苯胺柱前 衍生化法为准确测定 TTCA 光学纯度提供了一种可行的方法。 2 实验部分 2. 1 仪器与试剂 lC-20AT 型高效液相色谱仪、SPD-M20A 检测器（日本岛津公司）；OR-2090 在线旋光检测仪（ 日本 JASCO 公司）；CIass VP 色谱工作站、HCT-360 型柱温箱（天津恒奥科技发展有限公司）；AutopoI IV 型旋 光仪（美国