柱前衍生高效液相色谱法测定血清中克拉霉素的含量.pdfVIP

第 34 卷 分析化学 (FENXIHUAXUE) 研究简报 特刊 2006 年 9 月 ChineseJournalofAnalyticalChemistry S168 ~S170 往前衍生高效液相色谱法测定血清中克拉霉素的含量 魏敏吉＊ 吕 媛 王 珊 张 朴 刘 燕 (北京大学临床药理研究所,北京 100083) 摘 要 建立了 2,4-二硝基苯姘柱前衍生反相高效液相色谱紫外检测法测定血清中克拉霉素的含量,将在 碱性条件下甲基叔丁基醚的血清革取物,与 2,4-二硝基苯姘在 55C酸性条件下反应 30 min,然后用乙睛-0.05 mol/LpH7.2 磷酸盐缓冲液(48I52)在 AlltimaC18 色谱柱上进行分离,在 340 nm检测衍生物O 方法的线性范 围为 0.05 ~3.2 mg/L(rI0.9993);检出限为 30 -g/L,绝对回收率大于 89%,相对标准差小于 10%O 本方法 已用于克拉霉素在健康受试者中的药代动力学研究O 关键词 柱前衍生化,高效液相色谱法, 血清, 2,4-二硝基苯姘,克拉霉素 1 引 言 克拉霉素(clarithromycin)是新型大环内酯类抗生素,临床上主要用于治疗扁桃体炎~脓疤病~丹毒~ 毛囊炎及伤口感染等 1] O 在进行克拉霉素的药代动力学或治疗药物浓度检测研究中,需要建立高灵敏 度的测定方法O 目前测定血样中克拉霉素的浓度方法有高效液相紫外检测方法 2] ~微生物方法 3] ~液 相质谱方法 4] 和高效液相电化学检测方法 5] O 紫外检测方法因克拉霉素本身吸收不强且血样干扰成 分多,最低定量浓度仅达到 0.1 mg/L;因样品中存在活性代谢物,微生物法测定的是总的抗菌活性,没 有专属性; HPLC电化学检测和 LC-MS 灵敏度高,但需要特殊仪器且测试成本较高;文献 6] 报道用 9-fluorenylmethyloxycarbonyl-chloride(FMOC-Cl)对克拉霉素进行衍生化,衍生化试剂与克拉霉素的羟基 反应,采用荧光检测,但该方法最低定量浓度仅为 0.2 mg/L,灵敏度并没有实质性提高O 本实验采用 2,4-二硝基苯姘(DNPH)与克拉霉素中的碳基生成具有紫外吸收衍???物的原理,用柱前衍生化法结合 HPLC测定克拉霉素在体内的药物浓度O 经过考核和对比,本方法操作简单,专属性好,数据稳定,最低 定量浓度可以达到 50 -g/L,可以用于克拉霉素的体内药物浓度测定O 2 实验部分 2.1 仪器与试剂 1100 型高效液相色谱仪系统 ( Agilent公司), 包括 G1310A单元泵, G1313A标准自动进样器, G1314A可变波长检测器, ChemStation 色谱处理程序( 美国 Agilent公司);AlltimaC18 色谱柱 5 mm X 150 mmX4.6 mm(美国 Alltech 公司)O 克拉霉素标准品,纯度 96.40%( 中国药品生物制品检定所); 2,4-二硝基苯姘(分析纯);甲基叔丁基醚(色谱纯);乙睛( 色谱纯);空白血清( 北京大学第一医院血库 提供);其它试剂均为市售分析纯;实验用水为重蒸馏水O 2.2 色谱条件 流动相为乙睛-磷酸盐缓冲溶液(0.05 mol/L, 48I52, V/V, pH7.2)O 流速 1.0 mL/min,紫外检测 器波长 340 nm;柱温 室温;进样量 15 -LO 2.3 标准曲线绘制