二章 细胞破碎与固液分离技术.pptVIP

第二章 细胞破碎与固液分离技术;概述;;目的;选择的一般原则 A、提取产物在细胞质内，用机械法破碎 B、提取产物在细胞膜附近，用化学法 C、提取产物与细胞膜或细胞壁结合，可采用化学法和机械法结合的方法 ;;细胞结构与破碎;细胞破碎技术;破碎技术;方法;破碎技术;;;比较;破碎率的测定;测定释放的蛋白质量或酶的活力。通常将破碎后的细胞悬浮液离心，测定上清液中蛋白质的含量或酶的活力，并与所获得的标准数值直接比较。;原理：细胞破碎后，大量带电荷的内含物释放到水相，电导率上升，而与破碎率的增加呈线性关系。 先制定标准曲线：微生物的种类、处理的条件、细胞浓度、温度和悬浮液中电解质的含量 在同等条件下测其电导率，计算破碎率。;固液分离; 动、植物组织、体液等 胞外产物 提取 发酵液 → 预处理 →c分离 →c破碎 →碎片分离 → 初步纯化 → 精制 → 制成品 培养液 加 热 沉 淀 匀 化 离 心 沉 淀 分子筛 无菌过滤 酶反应 调 pH 离 心 超 声 萃 取 吸 附 离 子 超 滤 絮 凝 过 滤 胞 溶 过 滤 萃 取 亲 和 冻 干 错流过滤 研 磨 错流过滤 超 滤 吸 附 喷 干 憎 水 结 晶 电 泳;利用一种能将固体微粒截留而让流体通过的多孔介质，将固体微粒从气体中或液体中分离出来。;织物介质：最常用的过滤介质，工业上称为滤布(网)，由天然纤维、玻璃纤维、合成纤维或者金属丝编织而成。可截留的最小颗粒的直径为5-65微米。 多孔固体介质：具有很多微细孔道的固体材料，如多孔陶瓷、多孔金属及多孔性塑料制成的管或板，能截留1-3 ?m的微小颗粒。 堆积介质：由沙、木炭之类的固体颗粒堆积而成的床层，称作滤床，用作过滤介质使含少量悬浮物的液体澄清。 多孔膜：用于膜过滤的各种有机分子膜和无机材料膜。 ; 过滤推动力是指滤饼和过滤介质两侧的压力差。此压力差可以是重力或人为压差。增加过滤推动力的方法有： 1、增加悬浮液本身的液柱压力，一般不超过50KN/m2，称为重力过滤。 2、增加悬浮液液面的压力，一般可达500KN/m2称为加压过滤。 3、在过滤介质下面抽真空，通常不超过真空度86.6KN/m2，称为真空过滤。 此外，过滤推动力还可以用离心力来增大，称为离心过滤。 ;过滤阻力包括介质阻力和滤饼阻力。 大多情况下，过滤阻力主要取决于滤饼阻力。 ;Darcy定理 U = (1/A)?(dQ/dt)为流体的速度 (in: m/s)， ?p = 压力差 (in: Pa)， l = 床层厚度 (in: m)， K = Darcy’s 渗透系数，与流体和床层的性质有关。; 板框压滤机 转筒真空过滤机 带式真空过滤机 离心过滤机;板框压滤机的构造 由许多块带凹凸纹路的滤板与滤框交替排列组装而构成。 滤板和滤框多做成正方形 ，角上均开有小孔，组合后即构成供滤浆和洗涤水流通的孔道。滤框的两侧覆以滤布，围成容纳滤浆及滤饼的空间。 ;实验用板框压滤机;工业用板框压滤机;啤酒过滤; 应用：大规模生物分离的主要过滤设备，用于较难分离的低黏度发