结肠癌RKO细胞P物质和NK1免疫细胞化学检测的论文.docVIP

　　结肠癌RKO细胞P物质和NK1免疫细胞化学检测的论文 结肠癌rko细胞p物质和nk1免疫细胞化学检测 【关键词】 结肠肿瘤;rko细胞系;p物质;受体,神经激肽;免疫细胞化学 【摘要】 　　目的 探讨p物质及其受体神经激肽1(nk1)在体外培养的结肠癌细胞系rko 中的表达及免疫细胞化学定位。方法 将rko细胞接种于提前放入盖玻片的6 孔板进行细胞培养,细胞融合30％时将盖玻片取出进行免疫细胞化学染色。结果 在rko 细胞系中p物质和nk1呈阳性表达，p物质阳性表达多数位于细胞浆；而nk1阳性表达多数位于细胞浆，少数位于细胞膜。结论 神经内分泌机制可能参与了结肠癌的发病过程。 【关键词】 结肠肿瘤;rko细胞系;p物质;受体,神经激肽;免疫细胞化学 　　immunocytochemical expressions of substance p and neurokinin1 in rko cells of colon cancer ］ 　　zhao lingling, chen hua, edical college, qingdao, 266003, china); 　　［abstract］ objective to investigate the immunoexpressions of substance p and nk1 in rko cell lines of colon cancer. methods rko cells oved from the plate upon 30% of cell fusion, and the expressions of sp and nk1 of the cultured cells munocytochemical staining. results positive expressions of substance p and nk1 ainly found of the rko cells, embrane. conclusion the neuroendocrine mechanism might involve in the process of morbidity of colon cancer. 　　［key s; rko cell line; substance p; receptors, neurokinin1; immunocytochemistry 　　p物质属于速激肽家族,由ppta基因编码, 11 个氨基酸组成[1]。.它能够特异性结合并激活其受体神经激肽1 (nk1),后者属于7 次跨膜g蛋白耦联受体[2]。nk1 受体激活后,以g 蛋白作为第二信使活化pkc 和mapk/erk 通路[23]。近年来研究显示,g蛋白耦联受体介导的信号转导通路参与了某些恶性肿瘤的发病过程。赵双罗等[4]研究显示，从溃疡性结肠炎到癌前病变，再到结肠癌病人血浆中的p物质水平逐级增高。但目前还没有p物质在结肠组织及细胞中表达的报道。nk1在结肠癌组织及细胞可表达[5]。目前对p物质和nk1在结肠 rko 细胞系中表达情况及定位尚不清楚。本文采用免疫细胞化学染色技术，研究p物质和nk1 在体外培养的rko 细胞系中的表达情况及免疫细胞化学定位。现将结果报告如下。 　　1 材料与方法 　　1.1 材料 　　兔抗人p物质多克隆抗体（1∶200，工作液），购自北京中杉金桥生物公司；兔抗人nk1多克隆抗体(1∶200)购自millipore公司；正常山羊封闭血清、elivisiontm试剂盒、dab显色剂等均购自福州迈新公司；dmem(低糖)、胰酶(含有0.5 g/l胰酶和0.53 mol/l edta)购自gibco公司；胎牛血清购自paa公司。人结肠癌rko细胞系由浙江大学来茂德教授馈赠。 　　1.2 细胞培养 　　rko 细胞培养于含有体积分数0.05 胎牛血清的培养液中,隔天换液。在细胞90%融合时将其接种于预先置入盖玻片的6 孔板中,每孔细胞数约5×105个,置于37 ℃含体积分数0.05的co2培养箱(美国shel lab公司)中继续培养。在种板第2天,贴壁细胞融合30％将盖玻片取出,置40 g/l甲醛中固定15 min。 　　1.3 免疫细胞化学染色 　　采用elivision 两步反应系统免疫细胞化学染色,所有染色过程在室温下进行。细胞固定标本经pbs 冲洗后先用体积分数0.30 h2o2 孵育15 min,然后滴加非免疫山羊血清30 min 封闭非特异性结合位点。一抗孵育1 h 后,pbs冲洗，后滴加试剂a (增强剂)作用30 min和试剂b (辣根过氧化物酶聚合物)作用20 min,用dab