胆囊腺癌中KAI1mRNA、Kiss1mRNA表达的临床病理的论文.docVIP

　　胆囊腺癌中KAI1mRNA、Kiss1mRNA表达的临床病理的论文 【摘要】 目的 研究胆囊腺癌、慢性胆囊炎和胆囊结石组织中kai1mrna和kiss1mrna表达水平及其临床病理意义。方法 108例胆囊腺癌、15例慢性胆囊炎和20例胆囊结石组织标本常规制作石蜡包埋切片，kai1mrna和kiss1mrna染色方法为原位杂交染色法。结果 胆囊腺癌组织中kai1mrna和kiss1mrna阳性表达率明显低于慢性胆囊炎和胆囊结石组织（p＜0.05，p＜0.01）；腺瘤癌变或高分化腺癌、肿块最大径≤3cm、无淋巴结转移及未侵犯周围组织的病例kai1mrna和kiss1mrna阳性表达率明显高于低分化腺癌或粘液腺癌、肿块最大径＞3cm、淋巴结转移及侵犯周围组织的病例（p＜0.05，p＜0.01）。结论 kai1mrna和kiss1mrna表达可能是反映胆囊腺癌发生、进展、转移或侵袭潜力及预后的重要生物学标记物。 【关键词】 转移抑制基因 信使rna 原位杂交 kai1和kiss1均为肿瘤转移抑制基因，其表达水平下降或缺失与许多恶性肿瘤的转移和预后密切相关[19]。国内外尚未见胆囊腺癌及其良性病变组织中kai1mrna和kiss1mrna表达水平研究的文献报道。本文应用原位杂交染色法研究108例胆囊腺癌、15例慢性胆囊炎和20例胆囊结石组织中kai1mrna、kiss1mrna表达水平，探讨两者与胆囊癌临床病理特征的关系及其生物学意义。. 1 资料与方法 1.1 临床病理资料 收集本院、湘雅医院和湖南省人民医院1996年6月～2006年6月胆囊癌切除手术标本108例，男31例（28.7％），女77例（71.3％）。病理类型均为腺癌，其中腺瘤癌变9例（8.2％），高分化腺癌29例（26.9％），中分化腺癌29例（26.9％），低分化腺癌30例（27.8％），粘液腺癌11例（10.2％）；侵犯胆囊外周围组织器官59例（54.6％）；共有59例发生区域淋巴结转移（54.6％）；58例伴有胆囊结石（53.7％）；手术方式包括根治性切除34例（31.5％），姑息手术48例（44.4％）和因广泛转移不能手术26例（24.1％）。另收集15例慢性胆囊炎和20例胆囊结石组织标本作为对照。上述标本经4％甲醛固定后常规制作石蜡包埋，切片厚4μm。 1.2 主要试剂 kai1mrna和kiss1mrna原位杂交染色试剂盒购自武汉博士德公司，dabhcl显色试剂盒购自北京中杉生物技术公司。 1.3 方法 kai1mrna和kiss1mrna染色方法均为原位杂交染色法，其具体步骤如下：（1）石蜡切片经常规脱蜡至水化；（2）3％过氧化氢甲醇液15min，水洗；（3）胃蛋白酶消化10min，水洗；（4）预杂交液42℃ 2h；（5）杂交液42℃杂交过夜；（6）杂交后洗涤，2×ssc洗涤5min×2次，0.5×ssc洗涤5min×2次，0.2×ssc洗涤5min×2次；（7）5％小牛血清封闭液37℃ 20min；（8）生物素化鼠抗地高辛37℃ 1h，原位杂交专用pbs洗涤5min×3次；（9）abc液37℃ 30min，原位杂交专用pbs洗5min×3次；（10）滴加生物素化过氧化物酶37℃ 20min，原位杂交专用pbs洗5min×3次；（11）dabhcl显色液显色20min，蒸馏水洗涤；（12）苏木素复染1min，自来水返蓝15min；（13）酒精脱水，二甲苯透明，中性树胶封片。胞浆中出现明显棕黄色颗粒者为阳性细胞，以切片中阳性细胞率≥25％为阳性病例，＜25％者为阴性病例。以原位杂交试剂盒内阳性切片作为阳性对照，以原位杂交专用pbs液替代杂交液作为阴性对照。 1.4 统计学处理 将所得数据输入spss11.0统计软件包中，进行χ2检验、fisher精确概率法，检验水准α＝0.05。 2 结果 2.1 kai1mrna、kiss1mrna在胆囊腺癌、慢性胆囊炎及胆囊结石组织中的表达 108例胆囊腺癌kai1mrna和kiss1mrna表1 kai1mrna和kiss1mrna表达与胆囊癌临床病理特征的关系*：低分化腺癌与腺瘤癌变比较，pkai1mrna＝0.023，pkiss1mrna＝0.005;粘液腺癌与腺瘤癌变比较，pkai1mrna＝0.035，pkiss1mrna＝0.025;低分化腺癌与高分化腺癌比较，χ2kai1mrna＝7.49、p＜0.01,χ2kiss1mrna＝10.75、p＜0.01；粘液腺癌与高分化腺癌比较，χ2kai1mrna＝5.67、p＜0.05，χ2kiss1mrna＝5.46、p＜0.05；中分化腺癌与腺瘤癌变比较，p