中国人常见GJB2基因突变表达载体的构建及鉴定.pdfVIP

? 724 ? I Clin Otorhinolaryngol Head Neck S呗 rg(China) .Aug 2009. Vo123.No 16 中国人常见 GJB2 慕因突变表达载体的构建及鉴定铸 张延平 l 张元，丁 2 李丽娜 1 马磊 1 孙玉溪 1 张常寐 1 刘金伟 1 邓患严 1 祝成 z 〔摘要〕 目的:构建中国人常见 GJB2 基因突变 235 delC 、 299-300 delAT 和 176 del 16 bp 与增强型绿色荧 光蛋白 (EGF刊的融合蛋白表达载体，寻找体外研究 GJB2 ;1基因缺失突变致聋机制的有效途径。方法:用体外商 点突变法构建 235 delC 、 299-300 delAT 和 176 del 16 bp 突变全序列与 EGFP 表达载体，以此为模极 PCR 扩增 突变有效表达序列，将 PCR 产物连接到 pMDl 9-T 载体中. EcoR l/ BamHI 双酶切克隆载体.测序擦定序列正确性 后，将酶切产物插入 pEGFP-Nl 载体中，脂质体转染 H 应 K293 细胞，荧光1微镜观察我达的融合蛋白。结果: GJB2 基因突变 235 delC 、 299 唰 300 delAT 和 176 del 16 bp 在 HEK293 细胞中高效表达，表达主要位于细胞质中。 结论:成功构建 f 中国人常见 GJB2 基因突变 235 delC 、 299 … 300 delAT 和 176 del 16 bp 与 EGFP 的融合盗臼表 达载体，为进一步研究其致聋机制奠定了基础。 [关键词] 缝隙连接 2蛋白 26; 突变 z 绿色荧光蛋白 [中图分类号] R764.43 [文献标志码] A [文章编每] 1001-1781(2009)16-0724-04 Construction of GJB2 mutations common in Chinese EGFP fusion protein vectors ZHANGYanρ ing 1 ZHANG Yuanding 2 LI Lina 1 MA Lei 1 SUN Yurui 1 ZHANG Zonglin l LIU ] inweí 1 DENG Huiyan 1 ZHU Weí 2 (1 Department of Otolaryngology. the Second Affilíated Hospítal of General Hospítal of Chínese PLA, Beijing, 100091 ,Chína;2Department of Otolaryngology-Head and Neck Surgery, the First Hospita1 of Ji1in University) Corresponding author:ZHANG Yanping(Emai1:yzhan28@163.com) Abstract Objective: To construct GJB2 gene mutaitons common in Chinese EGFP fusion protein vectors. and to search for better way to stu