日本七鳃鳗口腔腺分泌蛋白BGSP-2的序列进化分析、基因克隆及诱导表达.pdfVIP

第 ??卷 第 ?期? 辽 宁 师 范 大 学 学报 ?自然科 学 版 ?? ???．??? ??．?? ????年 ? 月? ????????????????????????????????????? ?????????????????????????? ???．? ????? 文章 编号 ：?????????????????—????—??? 日本七鳃鳗口腔腺分泌蛋白??????的序列进化分析、基因克隆及诱导表达? 李庆伟 ，? 薛? 壮 ，? 白? 洁，? 于水燕 ，? 吴? 毓 ，? 刘? 欣? ?辽 宁师范大学 海洋生物功能基 因与蛋 白质组学研究所 ，辽宁 大连? ???????? 摘? 要 ：从实验构建的七鳃鳗 口腔 腺 ????文库 中获取 ??????????????????????????????????????基 因片段 ，并对 其进? 行生物信息学分析．??????扩增 ，已获得 日本七鳃鳗 口腔腺 ??????蛋 白的全序列 ????，将 目的基因与 ??????载? 体连接 ，进一步转化至 ???????表 达菌株 中，筛选阳性克隆 ，对 包涵体进 行变性 、复 性与纯化．结 果显示 已成 功获得成? 分 均 一 的 活 性 蛋 白．? 关 键 词 ：七 鳃 鳗 ；???? 文 库 ；生物 信 息 学 ；??????栽 体 ?阳 性 克 隆 子? 中 圈分 类 号 ：????? 文 献 标 识 码 ：?? 日本七 鳃鳗 ??????????????????属 圆 口纲 ，七 鳃 鳗 目 ，七 鳃 鳗科 ，七 鳃 鳗 属 ，是现 存 最古 老 的 无颌? 类脊 椎动 物之一 ．它 的特点 是 嘴呈 圆筒形 ，没 有上下 腭 ，口内有 锋 利 的角 质齿 ，借助 其 口吸附 于 鱼体 ，同? 时其 头部 两侧 的 口腔腺分 泌一 定 的 ??????????，有 助于 其吮食 宿 主血 液及组 织 ，为其 营寄生生 活创 造 了? 良好 的条 件?．本 实验 室前 期研究 结 果表 明 ，天 然 的七 鳃 鳗 口腔 腺 中含 有 ?种 表 达量 较 高 的蛋 白，并 将? 这 ?种 蛋 白质 分 别 命 名 为 ???????????????????????????????????????，???????????和 ?????????????? ?????????????????????????，????????????．为 进一 步研究 ??????蛋 白的生物 学 功能 ，本文 对其 进 行 了序? 列进 化分 析 、基 因克隆及诱 导 表达 摸索 与优化 ，并成 功 地 获得 了相关 活 性蛋 白 ，为 后续 进 行 的功 能 研 究? 奠定 了理 论基 础．? ?? 材 料方 法? ?．? 材 料? ?．???? 菌株 与质 粒? 质粒 ???????载 体 、???????菌 株为 本实 验室 保存．? ?．?．? 主 要 试 剂? 亲和 层析柱 ????．????????????购 自 ???????公 司 ；限制 性 核 酸 内切 酶 ?????／????Ⅲ、??????? 连接 酶 、???????????????? 聚合 酶 、琼 脂 糖 凝 胶 ??? 纯 化试 剂 盒 ?????????????????????????????? ????、质 粒小量 提取 试剂 盒和 蛋 白 ??????购 自大 连 ??????公 司 ；重 组质 粒 目的基 因序列 由大 连宝生 物? 服 务有 限公 司测定 ．????