酶工程1[中国药科大学生物工程所有课件].pptVIP

第三章 酶工程;酶工程简介 酶工程（Enzyme engineering）是指通过化学方法、酶学方法和DNA重组技术改善自然酶的形成、结构和性质，提高酶的催化活性、降低成本并在大规模工业化生产中应用。 主要内容： 1 酶的制备和酶与细胞的固定化 2 酶反应器的设计和放大 3反应条件的控制和优化 …….;酶工程的分类;一、酶的定义 酶是由生物体内活细胞产生的一种生物催化剂，按化学组成的不同主要分为核酸类酶（R酶）和蛋白质类酶（P酶）。 ;二、酶的分类与命名法 1 习惯命名法 底物名称： 淀粉酶、蛋白酶 催化反应性质：氧化酶、转氨酶 底物结合催化反应性质：胆固醇氧化酶、醇脱氢酶 来源：心肌黄酶、含铁酶 缺点：无系统性，一酶数名或一名数酶。 ;2 系统命名法与分类 国际生化联合会（IUB）酶学委会于1961年规定了酶的统一命名法及分类原则。 系统命名法：酶的名称由底物及反应类型两部分组成。 六大类：氧化-还原酶、转移酶、水解酶、裂合酶、异构酶和连接酶。 ;;三、酶的结构和特性 1 酶的结构 酶的组成成分 单纯酶——仅由蛋白质组成的酶。 结合酶——除蛋白质外，还有非蛋白质的成分。 全酶=酶蛋白+辅因子 辅因子有两种：辅酶和辅基 ;;根据酶的聚合状态，酶可以分为三类： 单体酶 寡聚酶 多酶复合体;酶的活性中心指酶分子中直接和底物结合，并和酶催化作用直接相关的部位。 组成： 由一些氨基酸残基的侧链基团组成。这些基团在一级结构上可能相聚很远，甚至可能不在一条肽链上，但在蛋白质空间结构上彼此靠近，形成具有一定空间结构的区域。 对于结合酶，辅因子常常是活性中心的组成部分。;酶活性中心的特点： 活性中心在酶分子总体积中只占相当小的部分（1-2%），相当于2-3个氨基酸。 都是酶分子表面的一个凹穴，有一定的大小和形状，但不是刚性的，而具有一定的柔性。 活性中心为非极性的微环境，有利于与底物结合。 底物与酶通过形成较弱键力的次级相互作用并结合到酶的活性中心。 酶的活性部位并不是和底物的几何图形正好吻合，而是在酶与底物结合的过程中，底物分子或酶分子或它们两者的构想同时发生一定变化后才能相互契合，这时催化基团的位置也正好处于所催化底物的敏感化学键部位。 ;2 酶的特性 ①催化效率高 ②专一性强 ③反应条件温和 ④催化活性受到调节和控制 ;四、酶的来源 酶作为生物催化剂普遍存在于动物、植物和微生物中，可直接从生物体中分离提纯。 酶的生产方法可分为提取法﹑发酵法以及化学合成法。 化学法仍在实验室阶段； 提取法是最早采用且沿用至今的方法，如从动植物组织液中提取胰蛋白酶和菠萝蛋白酶； 发酵法是50年代以来酶生产的主要方法，如生成葡萄糖异构酶和枯草芽孢杆菌蛋白酶等。 ;五、酶促动力学 六、酶的分离纯化与酶的活力测定 1 酶的分离纯化 细胞外酶和细胞内酶 在生物细胞内除了目标酶还有很多其他的酶，因此需要分离和纯化的步骤。 基本步骤： 破碎细胞膜 抽提 纯化 ;比活力：纯度的量度，指每毫克质量的蛋白质中所含的某种酶的催化活力，一般用单位/毫克蛋白（U/mg蛋白质表示）。酶的比活力越高，酶的纯度也就越高。 纯化倍数=每次比活力/第一次比活力 产率%=每次总活力/第一次总活力;2 酶的活力测定 1个酶活力国际单位是指在特定条件下，1min内生成1μmol产物的酶量（或转化1 μmol 底物的酶量）。;第二节 酶和细胞固定化;酶固定化技术发展史;一、固定化酶的制备;⒉固定化酶的特点 具有生物催化剂的功能，又有固相 催化剂的功能。 ①可重复使用，降低成本； ②反应后，酶底物产物易分开，产物中无残留酶，易纯化，产品质量高。 ③稳定性提高，反复使用多次后，酶的活力无明显下降； ④反应条件易于控制，可以自动控制，节约劳动力。 ;固定化酶的制备原则;⒊酶和细胞固定化方法 酶和细胞固定化方法 载体结合法 交联法 包埋法 网格型 微囊型 物理吸附法 离子结合法 共价结合法 热处理（细胞） ;酶和细胞固定化模式;结晶法;（ 1 ）吸附法;物理吸附法;离子吸附法; 吸附法的优点： 操作简单，条件温和，吸附剂可再生反复使用。 吸附法的缺点： 酶和载体的吸附力比较弱，容易在不适宜的pH、高盐浓度、高底物浓度或高温条件下解析脱落，易导致催化活力的丧失和污染反应产物等后果。;（ 2 ）包埋法; 网格型：包埋在高分子凝胶细微网格中。 将块状聚合形成的凝胶切成小块，或直