第五章基因工程抗体.doc

 HYPERLINK  更多相关文档免费下载请登录:  HYPERLINK -中文word文档库 第五章 基因工程抗体 本文档由【 HYPERLINK 中文word文档库】 HYPERLINK 提供，转载分发敬请保留本信息；  HYPERLINK 中文word文档库免费提供海量范文、教育、学习、政策、报告和经济类word文档。 a href=/word文档/a 分子生物学技术的发展，推动了免疫球蛋白遗传学的研究。抗体的研究从原来的血清学方法、氨基酸水平分析发展到大免疫球蛋白基因结构、表达及调控DNA水平的研究，揭示了抗体多样性、等位基因排斥现象、抗体的分泌型和膜结合型形式、H链类别转换以及亲和力成熟机制等多种生物学现象。自1975年Milstein和k?hler等人研制出单克隆抗体以来，抗体技术得到了广泛的应用和发展，但在生物研究和临床疾病的治疗中却遇到了一定的困难。异源性鼠抗体在人体内诱生免疫应答，产生抗小鼠抗体；人单克隆杂交瘤制备困难，生产量少，稳定性差；获得特异性类别抗体比较困难。随着对抗体基因的研究和DNA分子重组技术的应用，通过基因改造获得特异性抗体成为可能。1989年Huse等首次构建了抗体基因库，从而使抗体的研究从细胞水平进入到分子水平，并推动了第3代抗体—基因工程抗体技术的发展。至此，抗体的产生技术经历了三个阶段：经典免疫方法产生的异源多克隆抗体；细胞工程产生的鼠源单克隆抗体及基因工程产生的人源单克隆抗体。抗体产生的技术革命为抗体治疗开辟了广阔的前景。 第一节 免疫球蛋白概述 免疫球蛋白（immunoglobulin）是指具有抗体活性或化学结构与抗体分子相似的球蛋白。它是介导体液免疫重要的免疫球蛋白分子。免疫球蛋白可作为B细胞表面跨膜受体，参与膜信号转导，促进B细胞的激活、分化及凋亡。血浆中分泌型抗体，具有中和抗原、激活补体或介导细胞毒作用等功能。 一、抗体的生成理论 侧链学??( Side chain theory)， 模板学说 (Template theory )， 克隆选择学说(clonal selection theory) 二、抗体的结构 1、轻链与重链 Ig分子由两条轻链（light chain,L）和两条重链（heavy chain, H）组成。轻链的分子量约为24kD，重链的分子量约为55kD或77kD。轻链的种类有两种，即?和?。在同一Ig分子中，两条轻链是同型（isotype）的。重链的种类有5种，即?、?、?、?和?。根据重链的种类不同，可将免疫球蛋白分子分为5类：IgM（?链）、IgD（?链）、IgG（?链）、IgE（?链）和IgA（?链）。相同的两条重链轻链间二硫键（disulfide）连接呈“Y”型。相同的两条轻链也分别由链间的二硫键与“Y”型重链的双臂相连。 2、免疫球蛋白分子的区域结构 V（variable region, V）区 C（constant region, C）区 绞链区(hinge region) Fv区：轻链和重链的可变区相互作用形成Fv，为抗原结合部位。可变区因氨基酸序列较多变异而得名。但事实上氨基酸序列的变异并非随机均匀地分布在整个可变区，而是集中在几个较小的区域被成为高变区或超变区（hypervariable region），在一个完整的Ig分子内，L链的3个超变区和H链的3个超变区共同形成一个三维空间的抗原面。由于超变区在结构上与抗原互补，因此也称互补决定区（complementarity determining region, CDR）。在立体构象中，它们位于Fv的末端，直接参与抗体与抗原的结合。 3、免疫球蛋白分子的空间构象 图5-1 人Ig轻链多肽折叠示意图 从图5-1 可以看出，免疫球蛋白分子的空间构象是由组成Ig分子的多肽链折叠而成的。图中白色箭头表示?-折叠结构内的多肽排列，黑色条带表示链内二硫键，数字表示从N端起的氨基酸的位置。浅黑色条带表示V区CDR1、CDR2和CDR3环，它们一起形成轻链的抗原结构。轻链折叠成VL和CL两个Ig区，即免疫球蛋白折叠（IG fold）或抗体折叠。每个Ig区肽链长度为原来的1/2，各含110个氨基酸。Ig区为二层反向平行多肽组成的?-折叠片层结构。其中一层含有三条反向平行肽链，另一层则由四条反向平行的肽链组成。两个?-折叠片层间通过二硫键相连。V区的折叠主要决定于各CDR之间框架区内氨基酸序列的保守性。如V区序列中含有的约90个氨基酸构成的内二硫环（internal disulfide loop）。V区折叠之后，CDRS则突出于N端表面形成抗原结合部位。轻链C区的羧基端也形成一个Ig区。 三、抗体的功能 1、与抗原特异性结合 2、激活补体 3