核心蛋白聚糖对HuH7细胞增殖的影响及机制的论文.docVIP

　　核心蛋白聚糖对HuH7细胞增殖的影响及机制的论文 【摘要】 目的: 探讨核心蛋白聚糖(decorin, d)对huh7细胞系体外增殖的影响及机制。方法: 加入不同浓度(0、 25、 50、 75、 100、 125、 150、 200 μg/l)的d培养huh7细胞系不同时间(12、 24、 48、 72 h和2周), 用二甲基噻唑二苯基四唑溴盐(mtt)法及克隆实验测定细胞增殖速度和活力, 流式细胞术测定细胞周期和凋亡情况。结果: d浓度增加及作用时间延长, 细胞增殖速度减慢、 活力减低, g1期细胞增多, 凋亡增加。结论: d可能为一种负性调控蛋白, 可通过调节细胞周期, 抑制肝癌细胞的增殖, 促进其凋亡。 【关键词】 核心蛋白聚糖; huh7; 细胞周期; 凋亡 effects and mechanism of decorin on the proliferation of huh7 hepatoma carcinoma cells in vitro 　　shangguan jianying, dou kefeng, li xiao, hu xiaojun, zhang fuqin, yong zhaosheng, ti zhenyu* 　　department of hepatobiliary surgery, xijing hospital, fourth military medical university, xi’an 710032, china 　　[abstract] aim: to investigate the effects and mechanism of decorin( d) on the proliferation of huh7 hepatoma carcinoma cell line in vitro. methods: hepatoma carcinoma cells e(12, 24, 48, 72 h and 2 tt and clone test. the changes of cell cycle and apoptosis etry. results: the proliferation of huh7 cells could be inhibited by d in vitro and the inhibition effect e and dose dependent relationship. d could block cell cycle at g1 phase. apoptosis of hepatocarcinoma cells could be efficiently induced by d in a time/dosedependent manner. conclusion: d may be a negative regulatory protein inhibiting hepatoma carcinoma cell proliferation through inhibiting cell cycle and inducing apoptosis of cell in vitro. 　　[keyi 1640培养基购于gibco公司, 按说明以双蒸水溶解, 滤膜过滤除菌, 分装, -20℃冻存备用。新生牛血清为杭州四季青生物工程材料公司产品, 经56℃ 30 min水浴灭活后, -20℃冻存备用。96孔、 6孔细胞培养板为corningcostar公司产品。rebinant human decorin(catalog number: 43de)购自美国rd公司, 用pbs稀释浓度为1 000 μg/l, -20℃冻存备用。hepa class100 co2孵箱为thermo公司产品, ckx41荧光倒置显微镜为日本olympus公司产品, 流式细胞仪为beckman coulter公司产品。 　　1.2 方法 　　1.2.1 细胞培养 huh7细胞培养于100 ml/l新生牛血清rpmi1640培养液中, 含 105 u/l青霉素, 100 mg/l链霉素, 培养条件为37℃、 50 ml/l co2、 饱和湿度。培养的细胞均为上皮样贴壁生长, 细胞密度(0.1～1)×109/l, 每3～4 d传代1次, 取对数生长期细胞用于实验。 　　1.2.2 细胞处理 取对数生长期细胞调整密度至1×109/l, 接种于96孔板, 100 μl/孔。接种24 h后换液, 分别加入含0、 25、 50、 75、 100、 150、 200 μg/l d的培养液, 分别以pbs为空白对照、 不含d培养液为阴性对照, 每孔设4个复孔, 分别于12