酶工程2011选编.ppt

酶 工 程;;酶工程组成;酶学理论;酶的分离纯化; 酶的提取与分离纯化 预处理（pretreatment）：包括固液分离和细胞破碎（分离胞内产物）等。 初步纯化（rough fractionation） （提取）：除去与目的产物性质差异很大的杂质。 高度纯化（fine fractionation） （精制）：除去与产物性质相似的杂质。 浓缩与干燥（concentration and desiccation）（成品加工）:使酶与溶剂分离的过程。;酶的纯化和精制;纯化方案的评价; ;常用的方法 ：; ; ; ;酶制剂的保存：;固定化酶（immobilized enzyme）;固定化酶与水溶性酶相比，具有下列优点： ① 极易将底物、产物分开； ② 可以在较长时间内进行反复分批反应和装柱连续反应； ③ 在大多数情况下，可以提高酶的稳定性； ④ 酶反应过程可以加以严格控制； ⑤ 产物中没有酶的残留，简化了工业设备； ⑥ 较水溶性酶更适合于多酶反应； ⑦ 可以增加产物的收得率，提高产物的质量； ⑧ 酶使用效率提高，成本降低。;固定化酶在使用中存在如下的缺点： ① 固定化时，酶活力有损失； ② 增加了固定化的成本，工厂开始投资大； ③ 只能用于水溶性底物，而且较适用于小分子底物，对大分子底物不适宜； ④ 与完整菌体比，不适于需要辅因子的反应； ⑤ 胞内酶必须经过酶的分离手续。 ;制备原则 ;化学偶联;固定化技术;物理吸附法 ;离子结合法;影响酶蛋白在载体上吸附程度的因素 ;共价结合法;交联法;图 7－11 酶分子之间共价交联和与水不溶性载体共价偶联 酶分子；（a）酶分子之间用双功能基团的化学交联试剂相互交联成水不溶性的固定化酶；（b）酶分子被偶联到水不溶性载体上形成水不溶性的固定化酶;包埋法;网格包埋法;固定化酶的性质;固定化酶的性质 固定化对酶反应系统的影响 固定化对酶活性和酶反应系统的影响十分复杂，常因酶的种类、反应系统的组成，特别固定的方法以及载体不同而显著不同。 为了使问题简化，通常都要做两个共同的假设：( l ）酶在载体表面上或在多孔介质内的分布完全均匀。( 2 ）整个系统各向同性。在上述条件下，固定化酶对酶反应体系的影响可概括为如下三种类型。 ; 构象改变和立体屏蔽效应构象改变指酶在固定化过程中，酶与载体的相互作用引起酶活力中心或变构中心的构象发生变化，从而导致酶活性下降。这种效应，难以定量描写，也难以预测，通常出现于吸附法和共价偶联法。 立体屏蔽效应由于载体的空间大小，或是由于固定方法与位置的不同，对酶的活性中心或者是调节中心造成空间障碍，因而S与效应物无法接触，从而影响酶活性。 ;微环境影响 微环境是指紧邻固定化酶的环境区域。由于载体的亲水、疏水性质和介质的介电常数等直接影响酶的催化效率或者是酶对效应物作出反应的能力。通常可以通过改变载体与介质的性质可作出判断和调节。 分配效应与扩散效应与微环境密切相关。 分配效应由于固定化载体的亲水和疏水性质使酶的底物、产物以及其他效应物在微环境与宏观体系间发生了不等分配，改变了酶反应系统的组成平衡，从而影响了反应速度。 ;固定化酶的性质; ;固定化酶反应器的类型及其特点 A. 间歇式搅拌罐 间歇式酶反应器。由容器、搅拌器和恒温装置组成的。 酶的底物一次性加人反应器，而产物一次性取出。反应完成，将固定化酶滤出，再转人下一批反应。 优点，反应器结构简单，造价较低；由于搅拌使内容物混合均匀；反应温度和pH 值易于控制；传质阻力小，反应能迅速达到稳态；能处理难溶底物或胶状底物，适用于受底物抑制的酶反应。 缺点，反应效率较低，搅拌动力消耗大， 搅拌桨的剪切易使固定化酶颗粒受到磨损、 破碎，容易造成酶失活，游离酶难回收。 不适用于大规模工业生产。;B.连续式搅拌罐 向反应器投人固化酶和底物溶液，不断搅拌，反应达到平衡之后，再以恒定的流速补充新鲜底物溶液，以相同流速输出反应液。 优点，不需要将固定化酶滤出，因而操作较简便。 缺点，反应效率较低，搅拌动 力消耗大，搅拌桨的剪切力易 使固定化酶颗粒遭到破坏。 ;连续式搅拌罐; C. 固定床反应器又称为填充床反应器（packed bed reactor , PBR ）。 将固定化酶填充于反应器内，制成稳定的固定床。底物溶液以一定的方向和流速不断地流进固定床，产物从固定床出口不断地流出来。在固定床横切面上，液体流体流动速度完全相同，沿液体流动方向，底物浓度和产物浓度都是逐渐变化的。但是，在同一横切面上，无论是底物浓度，还是产物浓度都是一致的。因此，可以把PBR 看成是一种平推流型反应器或称活塞流反应器。 ;优点是：可以使用高浓度的生物催化