酶工程第四章选编.ppt

第四章 固定化酶与固定化细胞;第一节 概述 第二节 固定化方法 第三节 固定化酶性质 第四节 固定化酶反应动力学 第五节 固定化酶的应用;一 游离酶在应用中所存在的问题 1 酶在水溶液中参与反应，难以回收酶，导致应用生产成本高，而且应用过程难于连续化；此外酶蛋白残留给产物的分离纯化带来困难。 2 酶的稳定性一般较差，易受环境影响（物理因素、化学因素、生物因素），活力下降甚至失活。 ;二．固定化酶概况 定义:凡限制在一定的空间范围内并能连续反复地使用的酶。 发现：1916年Nelson和Griffin，骨粉吸附转化酶 研究：1953年，Grubhofer和Schloith，重氮化树酯，羧肽酶，淀粉酶，蛋白酶，核糖核酸酶 工业化：1969年千钿一郎，固定氨基酰化酶，D,L-氨基酸 不溶于水——水不溶性酶，固相酶和固着酶 1971年，第一届国际酶工程会议，“固定化酶”名称 ;三 固定化酶的优缺点 优点 缺点 重复使用 载体昂贵 产物易于分离 特性会发生改变 稳定性提高 部分酶活力丧失 连续加工 辅因子再生及多酶 反应存在问题;四 固定化菌体 用一定的方法对菌体或菌体碎片进行固定，直接应用菌体或菌体碎片中的酶或酶系进行催化反应。 五 固定化细胞 定义：凡限制在一定的空间范围内，并能连续反复地使用的能进行生命活动细胞。;五 固定化菌体或细胞的优缺点 优点 缺点 省去酶分离过程 细胞内蛋白酶对 辅因子再生及多酶反应 所需酶的分解 稳定性提高 副产物 细胞壁和膜阻碍底物 111111111111111和产物的渗透、扩散 ; 1973年，日本在工业上成功固定化大肠杆菌菌体，利用菌体中的天门冬氨酸酶，连续催化反丁烯二酸为L-天门冬氨酸。 ;第二节 固定化方法;二 载体类型 1 来自于自然的有机载体 优势:与酶有很好的相容性 多糖类物质及其衍生物(多孔,亲水) 纤维素及其衍生物(DEAE,CM) 葡聚糖(Dextran) 琼脂糖(agarose) 淀粉(starch) 壳聚糖(chitosan) 蛋白质(明胶gelatin ) ;2 无机载体 优势:高压稳定性 硅载体:多孔玻璃;硅土 矿物原料:粘土,斑脱土(火山灰分解成的一种粘土) ;3 无机合成载体 优势:化学及机械稳定性高 离子交换树脂 功能基团的共聚物 ;三 固定化方法 1 吸附法:通过弱的相互作用吸附到硅土,粘土,离子交换树脂表面,如离子键,氢键,疏水作用力及静电等.;1）物理吸附 定义：使用对蛋白质具有高度吸附能力的硅胶、活性炭、多孔玻璃、石英砂和纤维素等吸附剂，将酶吸附到其表面上使酶固定化的方法。 优点：价廉，易操作易再生 缺点：易泄漏，易受污染 ;静止法 反应器上直接吸附法 混合浴或振荡浴吸附法 例：高岭士吸附胰凝乳蛋白酶;皂土吸附过氧化氢酶,?－淀粉酶; 纤维素粉吸附糖苷水解酶; 火棉胶吸附木瓜蛋白酶，碱性磷酸酶，酯酶，葡萄糖-6-磷酸脱氢酶。;2）离子吸附 定义：酶蛋白在解离状态下因静电引力而固着于带有与酶蛋白电荷相反的离子交换剂上的固定化方法。 主要缺点：离子强度增加或者介质pH， 温度改变时，离子吸附不稳定，酶与载体解离。 ;3）疏水吸附 N－烷基（疏水）琼脂糖 黄嘌呤氧化酶、乳酸脱氢酶、碱性磷酸酯酶、脲酶（疏水性强）。 4）亲和吸附 伴刀豆球蛋白A （利用此蛋白与糖蛋白的专一性结合）－琼脂糖吸附糖蛋白。 5）螯合吸附 利用酶蛋白上的金属离子与载体基团的螯合吸附。;2 包埋法; 格子型包埋法 常用凝胶：聚丙烯酰胺凝胶，琼脂糖凝胶，海藻酸钙凝胶，角叉菜胶，明胶等。 为防止包埋固定化后酶从凝胶中泄漏出来，凝胶孔径应控制在小于酶分子直径的范围内。因而对于大分子底物的进入和大分子产物的扩散出去不利。;微胶囊法（半透膜包埋法） 定义：将酶包埋在由各种高分子聚合物制成的半透性小球内，制成固定化酶。 小球直径一般只有几微米至几百微米，称为微胶