稳定表达野生型PINK1蛋白SH.docVIP

　　稳定表达野生型PINK1蛋白SH 【摘要】 目的 构建常染色体隐性遗传早发性帕金森综合征（arep）pink1基因真核表达载体，建立稳定表达pink1蛋白的人神经母细胞瘤（sh-sy5y）细胞株。方法 采用聚合酶链反应（pcr）方法，以人胎脑cdna文库为模板扩增pink1基因全长cdna编码区序列，重组dna技术定向插入真核表达质粒pcdna3.1-myc-his(-)b，经酶切和测序鉴定后，用脂质体转染sh-sy5y细胞，通过g418筛选，挑选出稳定转染的单克隆株，经提取gdna进行pcr扩增、反转录-聚合酶链反应（rt-pcr）及rna水平及蛋白水平的表达。结果 成功构建了pink1-pcdna3.1-myc-his-(-)b真核表达载体，稳定转染sh-sy5y细胞后，经提取gdna扩增、rt-pcr及ent of stable expression of ent of neurology，xiangya hospital of central south university，changsha 410008，china abstract: objective to construct the eukaryotic expression vector of autosomal recessive early-onset parkinsonism (arep) an n